梅花鹿微卫星DNA富集文库的构建与鉴定

来源 :内蒙古农业大学学报:自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tornadohearwind
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梅花鹿基因组DNA经限制性内切酶MboI酶切,用1.5%的琼脂糖凝胶电泳回收400~1000 bp的DNA片段,与MboI连接接头相连接,连接产物与生物素标记的(AC)15微卫星探针变性及退火,再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉,经吸附,洗涤及洗脱,然后以洗脱产物为模版,以其中一个接头为引物进行PCR扩增,将扩增产物回收纯化并与pMD18-T载体相连接,转化大肠杆菌DH5a,构建梅花鹿(AC)n微卫星DNA富集文库,经测序分析表明该文库含重组克隆约为1 380个,其中计算得到阳性克隆率为82.9%。梅花鹿微卫
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