【摘 要】
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目的 制备人降钙素原（PCT）蛋白，用于抗体制备及检测试剂盒的研制。方法 通过分子克隆技术构建人PCT重组表达质粒（pET28a-PCT）,以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主细胞，进行PCT的原核表达，利用发酵罐进行大肠杆菌的高密度培养并优化发酵条件，镍柱纯化重组蛋白。标定重组蛋白水平后，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）验证重组蛋白作为标准蛋白在绘制水平-吸光度标准曲线中的应用价值。结果 培养大
【机 构】
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沧州医学高等专科学校/沧州纳米抗体技术创新中心
【基金项目】
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河北省重点研发计划项目（19272404D）； 河北省沧州市重点研发计划指导项目（172301001）；
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目的 制备人降钙素原（PCT）蛋白，用于抗体制备及检测试剂盒的研制。方法 通过分子克隆技术构建人PCT重组表达质粒（pET28a-PCT）,以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主细胞，进行PCT的原核表达，利用发酵罐进行大肠杆菌的高密度培养并优化发酵条件，镍柱纯化重组蛋白。标定重组蛋白水平后，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）验证重组蛋白作为标准蛋白在绘制水平-吸光度标准曲线中的应用价值。结果 培养大肠杆菌BL21（DE3）/pET28a-PCT,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，重组蛋白主要表达在细菌裂解上清液中。利用发酵罐优化溶氧量、补料及温度等参数，培养温度40℃,溶氧量设定为30%,10×肉汤（LB）浓缩培养基以100 mL/h速度加入补料，以IPTG终浓度0.2 mmol/L诱导4 h, PCT产量为1 405 mg/L,镍柱亲和纯化后，纯度超过90%。用ELISA试剂盒标定重组蛋白。绘制水平-吸光度标准曲线，PCT与试剂盒提供的标准蛋白之间几乎没有差异。结论 该研究通过发酵表达及亲和纯化的方式，制备了高纯度的PCT蛋白，为PCT抗体的制备及PCT检测试剂盒的开发提供了重要原料。
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