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摘 要 目的：研究青秦液对高尿酸血症比格犬体内相关活性的影响。方法：将40只比格犬随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组及青秦液组。采用灌服巯嘌呤及乙胺丁醇进行造模；秋水仙碱组按0.15mg/(kg•日)灌服秋水仙碱；青秦液组给予5g/(kg•日)青秦液灌胃。采用磷钨酸法测定血尿酸和尿尿酸，采用酶比色法测定黄嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脱氨酶(ADA)的含量。结果：秋水仙碱及青秦液均具有明显降低高尿酸血症比格犬血尿酸水平的作用，但二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)；在降低高尿酸血症比格犬血ADA活性作用方面，秋水仙碱组及青秦液组均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，且青秦液组比格犬血ADA含量明显低于秋水仙碱碱组(P＜0.05)；秋水仙碱组及青秦液组比格犬血XOD含量均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)。结论：青秦液具有明显降低高尿酸血症比格犬血尿酸水平及血ADA、XOD活性的作用；在降低高尿酸血症比格犬血ADA活性作用方面，青秦液组明显优于秋水仙碱组。
关键词 青秦液 高尿酸血症 尿酸代谢 代谢酶
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.001
高尿酸血症属于复杂的多基因遗传病。研究表明，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，使体内的尿酸生成过多或清除过低，引发高尿酸血症。青秦液是由青蒿、秦艽、秦皮、土茯苓、车前子、虎杖、苏木等组成的纯中药制剂［1］。临床观察结果显示，可以明显改善高尿酸血症血尿酸及尿尿酸水平并能调节高尿酸血症相关酶的活性。为进一步明确其体内相关活性，建立比格犬动物模型进行研究。
资料与方法
试验动物：健康雄性比格犬40只，体重10±0.5kg，由河南省实验动物中心提供，属封闭群，身体健康。实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》［2］。
试验药物：青秦液药物组成：青蒿15g，秦艽15g，秦皮10g，土茯苓15g，车前子15g，虎杖15g，苏木8g，忍冬藤25g，黄柏8g，苍术8g。共煎煮2次，合并2次药液，浓缩成2.2g/ml，4℃储存备用。巯嘌呤，乙胺丁醇，秋水仙碱。
试剂：尿酸试剂盒、XOD试剂盒、ADA试剂盒。
试验方法：①分组、造模及给药：将实验比格犬随机分为正常组(10只)、模型组(10只)、秋水仙碱组(10只)、青秦液组(10只)。除正常组外，各组比格犬每天上午按0.2g/kg体重灌服巯嘌呤及按0.25g/kg体重灌服乙胺丁醇进行造模［3］。秋水仙碱组每天下午按0.15mg/kg体重灌服秋水仙碱；青秦液组每天下午按5g/kg体重灌服青秦液，正常组灌服等容量纯化水。②检测：第7、14、21天各组比格犬空腹眼眦采血，每只0.5ml，5000转/分离心10分钟，分离血清，采用磷钨酸法测各组比格犬的血尿酸值，第14天将各组比格犬留尿3小时，尿液采用磷钨酸法测尿尿酸值。具体操作按试剂盒说明书进行。同时对第21天采集的血清用酶比色法检测血清中XOD和ADA的含量，具体操作按试剂盒说明书进行。
统计学处理：采用SPSS11.0统计软件进行统计学处理，所有数据均用(X±S)表示。均值之间比较采用t检验。
结 果
秋水仙碱及青秦液均具有明显降低高尿酸血症比格犬血尿酸水平的作用，但二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)；在降低高尿酸血症比格犬血ADA活性作用方面，秋水仙碱组及青秦液组均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，且青秦液组比格犬血ADA含量明显低于秋水仙碱碱组(P＜0.05)；秋水仙碱组及青秦液组比格犬血XOD含量均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，见表1和表2。
讨 论
随着基因分子生物学、细胞免疫学的深入发展，对本病病理机制有了全新的认识。研究发现，高尿酸血症病理机制与基因遗传有关。由体内合成或核酸分解代谢产生的尿酸占体内总尿酸的80%，从含嘌呤或核蛋白的食物中核苷酸分解占20%。参与尿酸代谢的嘌呤核苷酸有次黄嘌呤核苷酸(GMP)。研究表明，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，最终使体内尿酸生成过多。
嘌呤代谢催化酶发生缺陷主要包括：①磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)：嘌呤代谢过程中PRS活性过高可加速核糖焦磷与嘌呤核苷酸的合成，从而导致体内尿酸生成过多。研究表明，犬肝脏的PRS是由催化亚基PRS1、PRS2(34KD)和结合亚基PAP39(39KD)及PAP41(41KD)组成的四聚体，形成PRS家族，结合亚基PAPs总的氨基酸序列与催化亚基略有不同，形成PAPs亚家族，可抑制机体催化亚基的作用。人PRS的结构与犬相似，有研究发现，编码PRS的PRPs基因发生突变，可导致嘌呤核苷酸反馈抵抗的PRS活性增高。②次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶(HGPRT)：HGPRT基因发生突变可致HGPRT活性降低，从而导致鸟嘌呤转化为鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤转化为次黄嘌呤核苷酸减少，以致后两者的嘌呤代谢反馈减弱，使代谢终产物尿酸升高。近年通过对代谢综合征相关基因多态性研究发现，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因c677t突变与高尿酸血症有关，是高尿酸血症的一个独立危险因素。此外，腺嘌呤磷酸核糖转移酶、黄嘌呤氧化酶、谷胱甘肽还原酶、葡萄糖-6-磷酸酶等酶的异常也与高尿酸血症的发病有关［4］。
青秦液为纯中药制剂，具有清热解毒、化瘀止痛功效，临床对高尿酸血症或急性痛风发作均有良好的治疗效果，能有效降低患者血尿酸水平，并有消肿止痛、改善临床症状的作用。实验结果表明，青秦液改善血尿酸水平、治疗高尿酸血症及其急性关节炎病理损伤的作用机制在于能有效抑制炎性介质的过度释放，减少炎性反应过程中的免疫损伤，以及调节血尿酸代谢过程中相关酶的分泌水平，从而达到纠正高尿酸状态的目的。青秦液对ADA、XOD的作用机制及对其他相关酶作用效果和机制仍在研究中。
参考文献
1 孟凤仙,刘世菊,张继胜,等.青秦液对高尿酸血症大鼠尿酸代谢及相关酶活性的影响.中国中医药信息杂志,2009,16(4):33-35.
2 中华人民共和国科学技术部.关于善待实验动物的指导性意见,2006.
3 熊湘明,曲竹秋.比格犬高尿酸血症模型建立［J］.天津中医学院学报,2001,20(4):28-29.
4 陈光亮,徐叔云.高尿酸血症研究进展［J］.中国药理学通报,2003,19(10):1088-1092.
关键词 青秦液 高尿酸血症 尿酸代谢 代谢酶
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.001
高尿酸血症属于复杂的多基因遗传病。研究表明，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，使体内的尿酸生成过多或清除过低，引发高尿酸血症。青秦液是由青蒿、秦艽、秦皮、土茯苓、车前子、虎杖、苏木等组成的纯中药制剂［1］。临床观察结果显示，可以明显改善高尿酸血症血尿酸及尿尿酸水平并能调节高尿酸血症相关酶的活性。为进一步明确其体内相关活性，建立比格犬动物模型进行研究。
资料与方法
试验动物：健康雄性比格犬40只，体重10±0.5kg，由河南省实验动物中心提供，属封闭群，身体健康。实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》［2］。
试验药物：青秦液药物组成：青蒿15g，秦艽15g，秦皮10g，土茯苓15g，车前子15g，虎杖15g，苏木8g，忍冬藤25g，黄柏8g，苍术8g。共煎煮2次，合并2次药液，浓缩成2.2g/ml，4℃储存备用。巯嘌呤，乙胺丁醇，秋水仙碱。
试剂：尿酸试剂盒、XOD试剂盒、ADA试剂盒。
试验方法：①分组、造模及给药：将实验比格犬随机分为正常组(10只)、模型组(10只)、秋水仙碱组(10只)、青秦液组(10只)。除正常组外，各组比格犬每天上午按0.2g/kg体重灌服巯嘌呤及按0.25g/kg体重灌服乙胺丁醇进行造模［3］。秋水仙碱组每天下午按0.15mg/kg体重灌服秋水仙碱；青秦液组每天下午按5g/kg体重灌服青秦液，正常组灌服等容量纯化水。②检测：第7、14、21天各组比格犬空腹眼眦采血，每只0.5ml，5000转/分离心10分钟，分离血清，采用磷钨酸法测各组比格犬的血尿酸值，第14天将各组比格犬留尿3小时，尿液采用磷钨酸法测尿尿酸值。具体操作按试剂盒说明书进行。同时对第21天采集的血清用酶比色法检测血清中XOD和ADA的含量，具体操作按试剂盒说明书进行。
统计学处理：采用SPSS11.0统计软件进行统计学处理，所有数据均用(X±S)表示。均值之间比较采用t检验。
结 果
秋水仙碱及青秦液均具有明显降低高尿酸血症比格犬血尿酸水平的作用，但二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)；在降低高尿酸血症比格犬血ADA活性作用方面，秋水仙碱组及青秦液组均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，且青秦液组比格犬血ADA含量明显低于秋水仙碱碱组(P＜0.05)；秋水仙碱组及青秦液组比格犬血XOD含量均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，见表1和表2。
讨 论
随着基因分子生物学、细胞免疫学的深入发展，对本病病理机制有了全新的认识。研究发现，高尿酸血症病理机制与基因遗传有关。由体内合成或核酸分解代谢产生的尿酸占体内总尿酸的80%，从含嘌呤或核蛋白的食物中核苷酸分解占20%。参与尿酸代谢的嘌呤核苷酸有次黄嘌呤核苷酸(GMP)。研究表明，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，最终使体内尿酸生成过多。
嘌呤代谢催化酶发生缺陷主要包括：①磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)：嘌呤代谢过程中PRS活性过高可加速核糖焦磷与嘌呤核苷酸的合成，从而导致体内尿酸生成过多。研究表明，犬肝脏的PRS是由催化亚基PRS1、PRS2(34KD)和结合亚基PAP39(39KD)及PAP41(41KD)组成的四聚体，形成PRS家族，结合亚基PAPs总的氨基酸序列与催化亚基略有不同，形成PAPs亚家族，可抑制机体催化亚基的作用。人PRS的结构与犬相似，有研究发现，编码PRS的PRPs基因发生突变，可导致嘌呤核苷酸反馈抵抗的PRS活性增高。②次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶(HGPRT)：HGPRT基因发生突变可致HGPRT活性降低，从而导致鸟嘌呤转化为鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤转化为次黄嘌呤核苷酸减少，以致后两者的嘌呤代谢反馈减弱，使代谢终产物尿酸升高。近年通过对代谢综合征相关基因多态性研究发现，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因c677t突变与高尿酸血症有关，是高尿酸血症的一个独立危险因素。此外，腺嘌呤磷酸核糖转移酶、黄嘌呤氧化酶、谷胱甘肽还原酶、葡萄糖-6-磷酸酶等酶的异常也与高尿酸血症的发病有关［4］。
青秦液为纯中药制剂，具有清热解毒、化瘀止痛功效，临床对高尿酸血症或急性痛风发作均有良好的治疗效果，能有效降低患者血尿酸水平，并有消肿止痛、改善临床症状的作用。实验结果表明，青秦液改善血尿酸水平、治疗高尿酸血症及其急性关节炎病理损伤的作用机制在于能有效抑制炎性介质的过度释放，减少炎性反应过程中的免疫损伤，以及调节血尿酸代谢过程中相关酶的分泌水平，从而达到纠正高尿酸状态的目的。青秦液对ADA、XOD的作用机制及对其他相关酶作用效果和机制仍在研究中。
参考文献
1 孟凤仙,刘世菊,张继胜,等.青秦液对高尿酸血症大鼠尿酸代谢及相关酶活性的影响.中国中医药信息杂志,2009,16(4):33-35.
2 中华人民共和国科学技术部.关于善待实验动物的指导性意见,2006.
3 熊湘明,曲竹秋.比格犬高尿酸血症模型建立［J］.天津中医学院学报,2001,20(4):28-29.
4 陈光亮,徐叔云.高尿酸血症研究进展［J］.中国药理学通报,2003,19(10):1088-1092.