【摘 要】
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目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:81670650),江苏省自然科学基金(编号:BK20161071),江苏省大学生创新创业训练计划项目(编号:201710312039Y).
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目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序,通过脂质转染法将细胞转染到大鼠系膜细胞中,以未转染的系膜细胞为空白对照组,转染后的为实验组,Westernblot检测AATF所编码蛋白的表达水平。结果PCR扩增产物AATF片段约1600bp,与理论相符;构建所得pRP[Exp]-AATF重组质粒,经双酶切琼脂
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