【摘 要】
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目的 克隆构建含有胰岛素相关多肽3(IRP3)基因的BL21表达菌株,并对表达蛋白进行分离纯化、鉴定和复性.方法 采用DNA重组技术克隆获得IRP3-pET30a阳性BL21菌株,双酶切后琼脂糖凝胶电泳显示IRP3-pET30a质粒构建成功,利用镍金属亲和层析方法获得IRP3/HIS纯化蛋白,进一步利用SDS-PAGE和Western blot技术确认IRP3/HIS融合蛋白的纯化效果.结果 成功克隆IRP3-pET30a质粒,筛选获得含有IRP3-pET30a质粒的BL21表达菌株.从包涵体裂解上清液中
【机 构】
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厦门医学院厦门市海洋药用天然产物资源重点实验室,福建厦门 361000
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目的 克隆构建含有胰岛素相关多肽3(IRP3)基因的BL21表达菌株,并对表达蛋白进行分离纯化、鉴定和复性.方法 采用DNA重组技术克隆获得IRP3-pET30a阳性BL21菌株,双酶切后琼脂糖凝胶电泳显示IRP3-pET30a质粒构建成功,利用镍金属亲和层析方法获得IRP3/HIS纯化蛋白,进一步利用SDS-PAGE和Western blot技术确认IRP3/HIS融合蛋白的纯化效果.结果 成功克隆IRP3-pET30a质粒,筛选获得含有IRP3-pET30a质粒的BL21表达菌株.从包涵体裂解上清液中获得了纯化的IRP3/HIS融合蛋白并进行透析复性.结论 IRP3基因克隆成功及IRP3/HIS融合蛋白表达纯化,为IRP3蛋白的抗体制备和作为体外生长因子添加剂的应用打下基础.
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