【摘 要】
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目的应用抑制性消减杂交技术构建肝癌细胞凋亡消减杂交cDNA文库,以期克隆肝癌细胞凋亡相关基因.方法用三氧化二砷诱导人肝癌HCC-9204细胞凋亡,提取poly A+RNA,反转录合成cDNA
【机 构】
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中国人民解放军第四军医大学病理学教研室
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目的应用抑制性消减杂交技术构建肝癌细胞凋亡消减杂交cDNA文库,以期克隆肝癌细胞凋亡相关基因.方法用三氧化二砷诱导人肝癌HCC-9204细胞凋亡,提取poly A+RNA,反转录合成cDNA,消化成短片段后分成两组,分别与两种不同的接头连接,再与普通肝癌细胞的cDNA进行两次杂交及两次抑制性PCR扩增,将PCR产物与PT-Adv线性载体连接,转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆进行酶切鉴定,反向Northern blot分析差异基因的可靠性.结果成功地构建了具有高消减效率的人肝癌凋亡细胞cDNA文库,随
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