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采用2根强酸性阳离子交换柱、1根弱碱性阴离子交换柱和1根强碱性阴离子交换柱进行4柱串联,可以从RNA酶解液中分离得到5-尿苷酸,而不混有其它核苷酸,并对离子交换树脂种类、树脂量、洗脱剂等作了进一步研究。结果表明,采用4柱串联分离5-尿苷酸,其总收率达到92.1%、结晶纯度达到86%以上。