【摘 要】
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目的 探讨一种高效提取RNA噬菌体核酸的新方法,并通过核酸分析从基因水平了解宿主谱改变对噬菌体核酸的影响.方法采用传统的聚乙二醇(PEG)沉淀-蛋白酶消化-酸性酚提取法、Tripure 提取法以及抗体沉淀-盐酸胍一步法3种方法分别提取大肠埃希菌f2噬菌体及其宽宿主谱株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度.采用兼并引物逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及随机引物随机扩增多态性DNA 聚合酶链反应(
【机 构】
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710032,西安,解放军第四军医大学西京医院检验科,710032,西安,解放军第四军医大学西京医院检验科,第三军医大学军队流行病学教研室,710032,西安,解放军第四军医大学西京医院检验科,710
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目的 探讨一种高效提取RNA噬菌体核酸的新方法,并通过核酸分析从基因水平了解宿主谱改变对噬菌体核酸的影响.方法采用传统的聚乙二醇(PEG)沉淀-蛋白酶消化-酸性酚提取法、Tripure 提取法以及抗体沉淀-盐酸胍一步法3种方法分别提取大肠埃希菌f2噬菌体及其宽宿主谱株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度.采用兼并引物逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及随机引物随机扩增多态性DNA 聚合酶链反应(RAPD-PCR)比较分析噬菌体宿主谱改变前后其核酸序列组成的变化.结果抗体沉淀-盐酸胍一步法提取的噬菌体核酸具纯度高、条带完整等优点;f2噬菌体及其宽噬株均为6 000 bp左右的单链RNA噬菌体;两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPD-DNA片段差异明显,其中26条为可区分的DNA带型;噬菌体f2 cDNA在450 bp附近出现重复性较好的扩增片段,而其宽噬株cDNA在相同条件下未出现扩增产物.结论抗体沉淀-盐酸胍一步法较其他两种RNA病毒核酸提取法具有明显的优势,具有应用价值的新的RNA噬菌体核酸的提取方法;宽宿主谱噬菌体的宿主特异性裂解效应已从基因水平发生了变化。
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上海复旦大学附属华山医院检验医学中心是集临床检验、生化、免疫、微生物、分子生物学等众多学科为一体的现代化检验医学中心.中心在医学科学飞速发展的大环境下,本着"质量为本,服务临床"的宗旨,在不断改进现有检测技术的同时,积极开展新的检测项目,为临床诊断提供多元化的、准确可靠的实验诊断服务。
白塞病(BD)是一种病因不明的多系统慢性自身免疫性疾病,具有明显的地域分布特征和家族遗传倾向[1-3].尽管许多研究提供了人白细胞抗原(HLA)-B51与BD的相关性证据,但对正常人群和BD患者HLA-B51等位基因亚型分布了解甚少[3-5].而目前测定HLA-B51基因亚型的方法不但难以满足临床检测要求,也无法大规模开展有关BD易感基因检测.为此,我们研制BD HLA-B51基因分型芯片。
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