探讨CHOP依赖的内质网应激通路在雷公藤内酯醇诱导黑素瘤A375细胞凋亡中的作用机制。
方法培养人黑素瘤A375细胞，用12.5、25、50、100、200 nmol/L雷公藤内酯醇处理，以不加雷公藤内酯醇处理的细胞作为阴性对照组。分别作用一定时间后，光镜观察A375细胞形态变化，CCK8法检测药物对细胞的增殖抑制作用，以双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡，透射电镜观察内质网形态变化，Western印迹检测细胞GRP78、p-PERK、PERK及CHOP蛋白的表达及GRP78蛋白在药物作用下随时间变化的趋势，qPCR检测GRP78、PERK、CHOP mRNA相对表达量。
结果雷公藤内酯醇作用后，A375细胞变为细长梭形，胞质变少，细胞大小不一，形状不规则，出现较多突起。CCK8实验显示，不同浓度雷公藤内酯醇作用A375细胞24、48、72 h均对A375有抑制增殖作用，且与时间、浓度呈依赖关系（P < 0.05），24、48、72 h时半数抑制浓度分别为308、83、55 nmol/L。12.5、25、50、100、200 nmol/L雷公藤内酯醇组细胞凋亡率分别为10.3% ± 0.1%、14.6% ± 0.8%、17.4% ± 0.7%、21.1% ± 1.0%、29.5% ± 1.1%，均高于阴性对照组（3.3% ± 0.4%），差异均有统计学意义（P < 0.05）。200 nmol/L雷公藤内酯醇作用A375细胞24 h后透射电镜观察到内质网形态呈现损伤性改变。不同浓度雷公藤内酯醇作用A375细胞24 h后，GRP78、p-PERK、PERK、CHOP蛋白表达逐渐增高（P < 0.05），而GRP78蛋白表达量随药物作用时间的延长逐渐减少（P < 0.05）。qPCR结果示，不同浓度雷公藤内酯醇作用A375细胞24 h后，GRP78、PERK、CHOP mRNA相对表达量随着药物浓度的增加而增加，除12.5 nmol/L浓度组PERK mRNA外，各浓度雷公藤内酯醇组GRP78、PERK、CHOP mRNA与阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。
结论雷公藤内酯醇能够诱导内质网发生应激，随着药物作用浓度的增加和时间的延长，A375细胞会启动CHOP依赖的内质网应激反应性凋亡途径。