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目的
探讨人泪腺腺样囊性癌细胞的原代培养方法。
方法实验研究。取2011年5月16日至6月1日在天津医科大学眼科医院接受手术治疗的1位泪腺腺样囊性癌患者的术中标本,采用组织块培养法获得原代细胞。运用连续传代、机械刮除、反复贴壁和消化排除等方法去除杂细胞。通过相差显微镜、扫描电镜、透射电镜等观察细胞形态。免疫细胞化学法检测细胞波形蛋白 (vimentin) 、结蛋白 (desmin) 、S-100蛋白、细胞角蛋白 (cytokeratin,pan) 、CD34等蛋白的表达情况。免疫组织化学法检测肿瘤组织vimentin、desmin、S-100蛋白、cytokeratin (pan) 等蛋白的表达情况。消化法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间。
结果组织块原代培养第5天见周围开始有细胞爬出,此后细胞缓慢增殖,至第32天进行首次传代,第69天发现典型的上皮样细胞克隆。运用多种方法去除杂细胞后,至第8代细胞基本纯化。纯化后细胞现已稳定传至100代以上。相差显微镜下观察第25代细胞呈典型的上皮样细胞形态,可出现接触抑制消失。扫描电镜和透射电镜下第25代细胞呈现低分化恶性肿瘤细胞的典型特点,细胞间信号沟通丰富。细胞免疫化学法检测第25代癌细胞vimentin、cytokeratin (pan) 和S-100蛋白呈阳性,desmin、CD34蛋白呈阴性,与源肿瘤组织染色结果一致。细胞生长曲线类似“S”形,细胞倍增时间37.1 h。
结论采用组织块培养法可以获得基本纯化的人泪腺腺样囊性癌细胞,有可能通过此法获得稳定的人泪腺腺样囊性癌细胞系。 (中华眼科杂志,2013,49:902-908)