【摘 要】
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目的以鸡痘病毒为载体,表达HIV-1 Gag蛋白,进而研制AIDS疫苗.方法以鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因为侧翼,插入VV突变型P7.5串联启动子和牛痘病毒A包涵体晚期启动子与20个串
【机 构】
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解放军军需大学研究所解放军基因工程实验室，长春 130062
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目的以鸡痘病毒为载体,表达HIV-1 Gag蛋白,进而研制AIDS疫苗.方法以鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因为侧翼,插入VV突变型P7.5串联启动子和牛痘病毒A包涵体晚期启动子与20个串联的突变型早期痘苗病毒P7.5启动子组成复合启动子及LacZ报告基因构建重组表达质粒pUTAL.在AF1-P7.5复合启动子下游,插入编码中国流行株HIV-1 Gag基因(B亚型),构建了重组表达质粒pUTAL-Gag.重组质粒Gag与FPV共转染CEF细胞,进行同源重组.通过BUdR加压筛选,X-gal染色,获得重组鸡痘病毒vUTALG,用于感染BHK细胞并免疫小鼠.结果经Westem blot检测,重组病毒表达了Gag蛋白相对分子质量分别为55000、48000、24000和17000,为Gag蛋白的P55、P48、P24和P17蛋白.重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体.结论所重组的病毒成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工.
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