【摘 要】
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为有效预防大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV),实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RT-PCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测.结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10?12 mol,最佳退火温度分别为64.1°C和61.5°C,当巢氏RT-PCR扩增35
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业农村部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380;中国水产科学研究院珠江水
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为有效预防大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV),实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RT-PCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测.结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10?12 mol,最佳退火温度分别为64.1°C和61.5°C,当巢氏RT-PCR扩增35个循环时,可以检测质粒最低浓度为4.15个/μL拷贝数,最低模拟样品浓度为102 PFU/mL,与第1轮PCR相比,灵敏度均提高了10000倍,同时检测9种不同病毒,仅LBBV出现明亮特异性条带,在304个样品中,第1轮PCR检出阳性样品14株,检出率为4.60％,巢式RT-PCR检出阳性样品28株,检出率为9.21％;本实验建立的巢式RT-PCR检测方法灵敏度高且特异性好,可用于LBBV的早期检测及防控.
其他文献
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为研究鱼类信号与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)在抗病毒免疫应答中的作用,实验利用逆转录PCR(RT-PCR)和RACE-PCR技术从日本鳗鲡中扩增获得了STAT3及其剪切异构体(AjSTAT3-L和AjSTAT3-S).AjSTAT3-L及AjSTAT3-S开放阅读框全长分别为2349和1470 bp,编码782和489个氨基酸.基因结构分析结果显示,AjSTAT3-L具有23个外显子,AjSTAT3-
为探究过氧化物酶体增殖活化受体 γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator activ-ated receptorγcoactivator 1α,PGC1α)基因在团头鲂糖代谢中的作用,实验从团头鲂肝脏中克隆获得了PGC1α基因的片段序列,并对其开展了生物信息学分析;同时研究了饥饿、高糖(糖水平:45％)饲料及葡萄糖负荷对团头鲂脑和肝脏PGC1α表达的影响.结果显示,获得的团头鲂PGC1α基因cDNA片段长为2566 bp,其中包含1404 bp的开放阅读框并编码467个氨基酸,与草
9月22—25日,第四届全球水产养殖大会将在上海举行.全球水产养殖大会是由联合国粮食与农业组织(FAO)发起的全球性高级别政府间会议,每十年举办一次,此次为第四届.
为研究草鱼I型呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)非结构蛋白NS12的功能,实验利用酵母双杂交实验、GST融合蛋白沉降技术(GST pull-down)和对GCRV感染过表达宿主蛋白酶体亚基β7(proteasome subunit beta type 7,PSMB7)的草鱼卵巢细胞(grass carp ovarian cell,GCO)中ns12转录水平的表达量进行实时荧光定量PCR检测,研究PSMB7和NS12的相互作用.酵母双杂交实验结果表明,PSMB7与GCRV编码的膜
干扰素调节因子(IRF)家族成员是一类重要的转录因子,在机体细胞感染病毒时单独或共同调控干扰素基因(IFN)的表达.IRF家族蛋白结构非常保守.其中N端DBD结构域赋予了IRF蛋白结合IFN启动子的功能,而C端IAD主要介导蛋白互作,因而不同IRF成员可能在不同的信号通路中发挥功能.哺乳动物IRF家族有9个成员,IRF1～9.鱼类IRF家族有11个成员,除了IRF1～9外,还包括硬骨鱼类特有的IRF11,以及在鸟类基因组中也存在的IRF10.哺乳类研究表明,IRF1/3/5/7/9在病毒感染的细胞中正调控
为研究大菱鲆最适饲料精氨酸需求量及饲料精氨酸水平对大菱鲆生长和代谢的影响,选取初始体质量为(43.07±0.10)g的大菱鲆为对象,使用酪蛋白和明胶作为蛋白质来源,鱼油和大豆卵磷脂作为脂质来源,配制5组等氮等脂(51％粗蛋白和12.5％粗脂肪)的精制饲料,通过添加晶体氨基酸混合物,使得饲料中精氨酸含量分别为干物质的1.92％、2.65％、3.40％、4.17％和4.88％(对应饲料号为1、2、3、4、5),以喂食1.92％精氨酸水平饲料的处理组作为对照组,每个处理3个重复,每个重复12尾鱼,养殖周期为10
为了研究不同温度和摄食率对鲈鲤幼鱼摄食代谢特征的影响,在15和25℃条件下驯化4周后,以泥鳅块为饵料,按不同的摄食率(15℃下摄食率为1％、2％和4％体质量,25℃下摄食率为1％、2％、4％和6％体质量)投喂实验鱼[体质量(38.35±0.49)g,体长(14.22±0.10)cm],随后测定其耗氧率并计算其摄食代谢相关参数.结果显示,在相同的摄食率下,25℃驯化组静止代谢率、摄食代谢峰值、特殊动力作用(SDA)总耗能和SDA系数都显著高于15℃驯化组;25℃驯化组在2％和4％摄食率下的SDA时间显著小于
为了预防大菱鲆疥疮病,本研究将杀鲑气单胞菌菌株HHSM1905经甲醛灭活制备成灭活疫苗,通过腹腔注射途径免疫健康大菱鲆;对免疫后大菱鲆血清抗体效价、血清溶菌酶(LZM)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性及疫苗保护率进行测定;以β-actin为内参,对免疫相关基因(IL-1β、TLR-5、MHCⅠ、MHCⅡ-α、CD4)表达情况进行定量PCR分析.结果显示,在免疫后2周时,疫苗组血清抗体效价显著高于对照组并达到最大值;疫苗组LZM活性在免疫2周时达到峰值,4周时仍与对照组保持显著差异;疫苗组ACP活性在免疫后的
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