【摘 要】
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从人胚肝组织中提取总RNA,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法获得人内皮抑素编码序列,采用定点突变技术将his2和His4双突变为Leu2和Val4.将突变基因cDNA插入含有T7启动子的质
【机 构】
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中国科学院长春应用化学研究所,中国生物技术集团总公司
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从人胚肝组织中提取总RNA,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法获得人内皮抑素编码序列,采用定点突变技术将his2和His4双突变为Leu2和Val4.将突变基因cDNA插入含有T7启动子的质粒pET-28b中构建表达质粒pMendo,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选表达菌株BL21-Mute,表达菌株经IPTG诱导后以包涵体方式产生大量内皮抑素突变蛋白.SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白占菌株可溶性蛋白质的30%.复性、纯化的内皮抑素突变蛋白纯度达到98%,失去抑制人脐静脉内皮细胞增殖的活
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