【摘 要】
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目的克隆人野生型parkin基因并构建真核表达载体pCDNA3.1-parkin,将重组质粒转染PC12细胞获得高表达人野生型parkin基因的PC12细胞克隆.方法从胎脑组织中提取总RNA,用RT-PCR
【机 构】
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上海第二医科大学附属瑞金医院神经科、帕金森病诊疗与研究中心
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目的克隆人野生型parkin基因并构建真核表达载体pCDNA3.1-parkin,将重组质粒转染PC12细胞获得高表达人野生型parkin基因的PC12细胞克隆.方法从胎脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得人野生型parkin基因的全长cDNA,插入pCR2.1-TA克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCD-NA3.1,利用脂质体将重组质粒转染PC12细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,采用RT-PCR和Western Blot方法鉴定人野生型parkin基因在PC12细胞中
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