稳定表达T7RNA聚合酶PK-15细胞系的建立

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：yuantxunda

【摘要】

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为构建稳定表达T7RNA聚合酶（RNAP）的猪肾细胞系（PK-15）,本研究采用PCR方法,以E.coliBL21（DE3）细菌基因组为模板扩增T7RNAP基因,将其克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN

【作者】

：

黄俊华贺番孙元张鑫常天明李宏宇仇华吉

【机构】

：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室

【出处】

：

中国预防兽医学报

【发表日期】

：

2011年5期

【关键词】

：

逆转录病毒载体 T7RNA聚合酶稳定细胞系

【基金项目】

：

国家973计划项目(2005CB523202)

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为构建稳定表达T7RNA聚合酶（RNAP）的猪肾细胞系（PK-15）,本研究采用PCR方法,以E.coliBL21（DE3）细菌基因组为模板扩增T7RNAP基因,将其克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-T7。采用脂质体将pLXSN-T7转染至PT67细胞中,经G418筛选培养获得重组逆转录病毒rMLV-T7,将其接种于PK-15细胞进行G418加压筛选和纯化;应用PCR、间接免疫荧光试验及T7启动子控制下的红色荧光蛋白的重组表达质粒（pET-RED）进行瞬时表达,检测T7RNAP的表

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