【摘 要】
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目的 观察应力刺激对大鼠颞下颌关节滑膜细胞蛋白多糖4(proteoglycan 4,PRG-4)表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将体外培养的20只SD大鼠颞下颌关节滑膜细胞分为两组,加力组施加间歇静压力,压力值100 kPa,加载频率为4 h/d;对照组为未加载应力的滑膜细胞.采用蛋白质印迹法和细胞免疫荧光技术分别在实验各时间点检测Smad通路和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院整形美容中心,杭州,310013,浙江大学医学院附属第一医院整形美容中心,310053杭州,浙江中医药大学口腔医学院口腔颌面外科,310053杭州,浙江中医药大学口腔医学院口
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目的 观察应力刺激对大鼠颞下颌关节滑膜细胞蛋白多糖4(proteoglycan 4,PRG-4)表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将体外培养的20只SD大鼠颞下颌关节滑膜细胞分为两组,加力组施加间歇静压力,压力值100 kPa,加载频率为4 h/d;对照组为未加载应力的滑膜细胞.采用蛋白质印迹法和细胞免疫荧光技术分别在实验各时间点检测Smad通路和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)通路相关蛋白的表达变化;应用转化生长因子(transforming growth factor,TGF)β1受体抑制剂SB431542预处理后,蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR技术观察72 h后对照组和加力组PRG-4表达的变化.结果 蛋白质印迹法检测显示,间歇静压力作用1h后,Smad-2、-3蛋白磷酸化水平显著升高,分别在2、4h达到峰值.而在实验1、2及4h观察p38蛋白磷酸化水平与对照组相比无明显变化.细胞免疫荧光结果显示,间歇静压力作用使Smad-2、-3蛋白发生核转位,且胞内荧光信号比对照组明显增强(24.11 ±4.70) (P ＜0.05).实时荧光定量PCR检测显示,间歇静压力促进滑膜细胞PRG-4 mRNA的表达量(1.48 ±0.08)显著高于对照组(P＜0.05),加入SB431542预处理后再加力,PRG-4 mRNA表达量较加力组显著降低(0.47 ±0.05) (P ＜0.05).蛋白质印迹法检测显示,各组PRG-4蛋白表达量受抑制趋势与实时荧光定量PCR结果相一致.结论 Smad信号通路是参与调节间歇静压力诱导滑膜细胞PRG-4表达的一条重要途径。
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