目的 建立简便、准确、实用的检测乙型肝炎病毒耐拉米夫定多聚酶(P)基因变异的方法.方法根据HBV基因序列,设计5只寡核苷酸引物,用巢式聚合酶链反应(nested PCR)分别扩增HBV P基因B区和C区片段,产物用Nde Ⅰ或NIa Ⅲ酶切,琼脂糖胶电泳,分析酶切产物长度多态性(RFLP),建立检测P基因变异的方法.对30例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者检测YMDD基序及526位点变异,16例未用拉米夫定的慢乙肝患者为对照.4份PCR产物作克隆测序以验证方法的准确、可靠.结果所建的巢式PCR-RFLP方法操作简便、快速,从模板提取到酶切后电泳分析仅需11h;灵敏度高,可检测到103拷贝/ml的HBV DNA;结果准确,4份经酶切分别判断为野毒株或变异株的标本经测序证实.30例用拉米夫定的慢乙肝患者中,发现单纯YMDD变异8例(26.7%),YMDD联合L526M变异3例(10.0%),16例对照未检出上述位点的变异.结论本方法简便、准确,适合较大样本检测.可用于临床筛检常见拉米夫定耐药性HBV P基因变异。