日本乙型脑炎病毒GⅢ型标准品质粒的构建

来源 :医学综述 | 被引量 : 0次 | 上传用户：young200909

【摘要】

：

目的构建检测日本乙型脑炎病毒(JEV)GⅢ型拷贝数的质粒标准品,利用该质粒标准品定量检测病毒的拷贝数。方法通过设计引物经反转录聚合酶链反应扩增JEV相对保守区序列(prM结构

【作者】

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饶清何文姬龙淑英蒋鸿超孙强明张桢

【机构】

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昆明医科大学附属儿童医院昆明市儿童医院检验科,云南省儿童重大疾病研究重点实验室昆明市儿童医院儿科研究所,中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

【出处】

：

医学综述

【发表日期】

：

2020年24期

【关键词】

：

日本乙型脑炎病毒实时荧光定量聚合酶链反应质粒标准品 Japanese encephalitis virus Real-time quantitative f

【基金项目】

：

中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2016-12M-1-019),云南省卫生健康委员会医学后备人才培养计划(H-2018012),昆明市卫生科技人才培养暨内设研究机构建设项目(2017-SW(研)-02)

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目的构建检测日本乙型脑炎病毒(JEV)GⅢ型拷贝数的质粒标准品,利用该质粒标准品定量检测病毒的拷贝数。方法通过设计引物经反转录聚合酶链反应扩增JEV相对保守区序列(prM结构蛋白),得到的目的片段克隆连接到pMD19-T载体上,从而获得JEV质粒标准品。随后,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)得到质粒标准品的标准曲线方程以及对JEV患者血清中病毒拷贝数进行检测。结果构建的JEV质粒标准品的RT-qPCR结果显示:相同浓度复孔间Ct值差异小(<0.5),熔解曲线峰值单一。得到的标准曲线方程

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