IL–17F/IL–17RC对大鼠肺微血管内皮细胞小窝蛋白1表达的影响

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目的

探讨白细胞介素(IL)–17F及IL–17受体C(IL–17RC)对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)小窝蛋白1(Cav–1)表达的影响。

方法

将体外培养的大鼠PMVEC分为时效实验组以及IL–17RC信号通路干预实验组;根据时效实验组结果:即IL–17F诱导大鼠PMVEC的Cav–1及其磷酸化表达峰值的时间,制定IL–17RC信号通路干预实验组IL–17F与大鼠PMVEC孵育时间:(1)时效实验组:100 ng/ml的IL–17F刺激0、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h后Western印迹法检测Cav–1表达以及0、10、30、60、90、120 min后检测Cav–1及其磷酸化(p–Cav–1)的表达;(2) IL–17RC信号通路干预实验组:siRNA病毒与大鼠PMVEC预孵育3 d后分成2组,第1组给予100 ng/ml的IL–17F刺激60 min后检测p–Cav–1表达,第2组给予100 ng/ml的IL–17F刺激24.0 h后检测Cav–1表达,各组分别设对照组、无意义–siRNA组、IL–17RC–siRNA组、IL–17F组以及无意义–siRNA +IL–17F组作为参照。

结果

IL–17F时间依赖性增强大鼠PMVEC表达Cav–1,0、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h相对表达量分别为(1.139±0.134)、(1.276±0.166)、(1.604±0.080)、(2.115±0.231)、(2.763±0.226)、(3.309±0.493)、(3.963±0.169),1.5 h时开始显著高于0 h,24.0 h时达峰值且显著高于0、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0 h(均P<0.05);IL–17F时间依赖性增强p–Cav–1表达,0、10、30、60、90、120 min相对表达量分别为(0.540±0.085)、(0.880±0.084)、(1.437±0.297)、(1.491±0.212)、(1.017±0.210)、(0.882±0.074),10 min时开始显著高于0 min,60 min时达峰值且显著高于0、10、30、90、120 min(均P<0.05),然后逐渐下降,120 min时仍高于0 min。IL–17RC–siRNA可显著抑制IL–17F诱导的Cav–1和p–Cav–1的表达(2.126±0.318比3.897±0.424和1.014±0.136比1.431±0.298,均P<0.05)。

结论

IL–17F时间依赖性增加大鼠PMVEC的Cav–1及p–Cav–1表达;沉默大鼠PMVEC的IL–17RC表达显著抑制IL–17F诱导的Cav–1及p–Cav–1表达。

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