【摘 要】
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从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pWEB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及Blastx搜索Gen
【机 构】
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广西亚热带生物资源保护利用重点实验室(广西大学),广西南宁,530005;微生物及植物遗传工程教育部重点实验室(广西大学),广西南宁,530005;广西大学生命科学与技术学院,广西南宁,530005
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从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pWEB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及Blastx搜索GenBank分析木聚糖酶基因.结果构建得到一个包含约5万个克隆的宏基因组文库,文库中外源DNA总容量约为1.8×106 kb,获得2个表达木聚糖酶活性的克隆:pGXN1050和pGXN1051,鉴定分析表明:pGXN1050上潜在的木聚糖酶基因umxyn11A具1个771bp的ORF(Open Reading Frame),可编码含257个氨基酸的蛋白质,所编码产物与混合纤维弧菌(Cellvibrio mixtus)的内切-1,4-β-木聚糖酶(GenBank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有46%的一致性和57%的相似性;pGXN1051上潜在的木聚糖酶基因umxyn11B具一个723bp的ORF,可编码含241个氨基酸的蛋白质,编码产物与混合纤维弧菌的内切-1,4-β-木聚糖酶(GenBank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有73%的一致性和80%的相似性.木聚糖酶Umxyn11A和Umxyn11B都属于糖基水解酶家族11的成员.
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