【摘 要】
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目的 观察重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)和重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)联合应用诱导小鼠骨髓造血干细胞向树突状细胞(DC)分化的结果.方法 6～8周的C57小鼠,处死后取股骨和胫骨,取骨髓细胞,使用rmIL-4和rmGM-CSF进行诱导、培养.诱导第0、3、8、12天时,在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况.诱导第0、6、12天时,采用流式细胞术进行细胞表型鉴定(以CD45+的细胞中CD11c+CD86+细胞占比表示).诱导第6天时,收集细胞悬液后加入HIS-EgG1Y16
【机 构】
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新疆医科大学基础医学院免疫学教研室,乌鲁木齐830011;贵阳市妇幼保健院;新疆医科大学第五附属医院
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目的 观察重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)和重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)联合应用诱导小鼠骨髓造血干细胞向树突状细胞(DC)分化的结果.方法 6～8周的C57小鼠,处死后取股骨和胫骨,取骨髓细胞,使用rmIL-4和rmGM-CSF进行诱导、培养.诱导第0、3、8、12天时,在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况.诱导第0、6、12天时,采用流式细胞术进行细胞表型鉴定(以CD45+的细胞中CD11c+CD86+细胞占比表示).诱导第6天时,收集细胞悬液后加入HIS-EgG1Y162抗原分别培养12 h与24 h后,采用流式细胞术进行细胞抗原捕获能力鉴定及成熟度观察(以结合HIS-EgG1Y162抗原的细胞占比表示细胞抗原捕获能力,以CD45+的细胞中CD11c+CD86+、CD11c+MHC-Ⅱ+细胞占比表示细胞成熟度).结果 诱导第0天时,细胞体积较小,呈类圆形悬浮于细胞培养液中;诱导第3天时,少量细胞开始出现“伪足”,细胞成团生长且数量开始增多;诱导第8天时,细胞体积增大,细胞出现明显的“突触”,呈多边形聚集于培养皿中央;诱导第12天时,细胞形态不规则,突触明显变长,集落细胞团形成.诱导第0、6、12天时,CD45+的细胞中CD11c+CD86+细胞占比分别为1.170％ ±0.302％、6.120％ ±0.245％、16.000％±0.294％,两两比较,P均<0.05.诱导第6天时,加入HIS-EgG1Y162抗原共培养12 h后,结合HIS-EgG1Y162抗原的树突状细胞占比为1.760％±0.065％,CD45+的细胞中CD11c+CD86+、CD11c+MHC-Ⅱ+细胞占比分别为8.67％±0.38％、11.90％±0.49％.;加入HIS-EgG1Y162抗原共培养24 h后,结合HIS-EgG1Y162抗原的树突状细胞占比为13.400％±0.408％,CD45+的细胞中CD11c+CD86+、CD11c+MHC-Ⅱ+细胞占比分别为20.10％±0.29％、16.70％±0.24％;两者相比,P均<0.05.结论 rmIL-4和rmGM-CSF联合应用诱导培养小鼠骨髓造血干细胞,可获得不同分化阶段的DC,且获得的未成熟DC具有较强的抗原捕获能力.
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