【摘 要】
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目的 利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白。方法 从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到
【基金项目】
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国家自然科学青年基金(81601861),中国博士后科学基金(2016M602452),广东省中医院院内专项(2016KT1435)
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目的 利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白。方法 从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到3种原核质粒pET-28b、pET-32a(+)和pHSIE中,再将测序完全正确的克隆质粒用CaCl2法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,并筛选最优表达条件,经Western-blot和SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。结果 3种质粒载体携带的目的基因DNA测序结果证实其很好地连接入载体质粒,表达的ADA蛋白经Wes
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