【摘 要】
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目的建立稳定表达中国近交系版纳微型猪(BMI)α1,3-半乳糖苷基转移酶基因(α1,3-GT)和α-半乳糖基(Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R,α-gal)的人肺癌细胞株,为进一步研究人体血清经补
【机 构】
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四川大学华西医院肿瘤分子诊断研究室生物治疗国家重点实验室,郧阳医学院附属太和医院肿瘤科
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目的建立稳定表达中国近交系版纳微型猪(BMI)α1,3-半乳糖苷基转移酶基因(α1,3-GT)和α-半乳糖基(Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R,α-gal)的人肺癌细胞株,为进一步研究人体血清经补体依赖的细胞毒性作用杀伤表达异种移植抗原的肿瘤细胞提供细胞模型。方法将含有版纳微型猪α1,3-GT基因的pEGFP-CMV-GT质粒经脂质体法体外转染人肺腺癌细胞A549,G418筛选稳定表达的细胞克隆并扩增,命名为A549-GT。用RT-PCR检测A549-GT中α1,3-GT基因的mRNA表达,荧光显微镜和流式细胞仪检测α1,3-GT在细胞膜表面合成α-gal表位的能力以及A549-GT与人血清中Ig M和补体C3结合情况。检测转染细胞形态学、生长增殖能力以及裸鼠成瘤性等生物学特征。结果经G418反复筛选获得了稳定转染α1,3-GT基因的A549-GT的细胞系,该细胞中检测到α1,3-GTmRNA和α-gal表达。A549-GT传代至今已2年,α-gal表达的阳性细胞达80.1%±3.2%。A549-GT细胞能与人血清中的Ig M结合并有补体C3沉积。其生物学特性与亲代A549细胞相比未发生变化。结论成功获得持续稳定表达猪α1,3-GT和α-gal的细胞系A549-GT,为该基因在后续肿瘤免疫治疗中的研究提供有用的细胞研究模型。
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