【摘 要】
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目的探讨短期和长期过氧化状态对Sestrin2(Sesn2)及PKB胰岛素信号的影响及调控机理。方法在人肝HepG2细胞株以葡萄糖氧化酶(GO)和含糖培养基共培养4h或16h分别造成细胞短期和
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目的探讨短期和长期过氧化状态对Sestrin2(Sesn2)及PKB胰岛素信号的影响及调控机理。方法在人肝HepG2细胞株以葡萄糖氧化酶(GO)和含糖培养基共培养4h或16h分别造成细胞短期和长期氧化状态;或胰岛素刺激(15min或16h),然后以蛋白印迹法检测Sesn2蛋白含量和胰岛素信号变化(如PKBSer473和Thr308磷酸化水平)。为明确Sesn2作用,用Sesn2siRNA沉默Sesn2后,探讨胰岛素信号及相关信号变化。结果 GO和胰岛素处理均可明显增加HepG2细胞Sens2蛋白水平;GO短期(4h)处理可明显刺激胰岛素标志性信号分子PKBSer473的磷酸化并刺激细胞Sesn2蛋白升高;而长时间(16h)GO处理则可抑制胰岛素刺激的Sesn2表达作用;Sesn2siRNA转染后,可增强胰岛素刺激的PKBSer473和Thr308位点的磷酸化作用。因此,Sesn2对上述不同机制调控的两个PKB磷酸化位点均有抑制作用。结论 HepG2细胞在短期氧化状态下,可激活PKB活性(PKBSer473磷酸化)并诱导Sesn2蛋白表达;长期过氧化及胰岛素刺激情况下能激活Sesn2功能,而Sesn2可分别通过对PKBSer473及PKBThr308两个活性位点的抑制性作用和调控,实现对胰岛素信号及PKB活性的长期负反馈平衡作用。
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