【摘 要】
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目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18, BoIL-18)成熟蛋白基因, 并鉴定其生物学活性.方法:设计一对特异性引物, 将编码BoIL-18的成熟蛋白基
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院传染病实验室,河南科技学院动物科学学院
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目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18, BoIL-18)成熟蛋白基因, 并鉴定其生物学活性.方法:设计一对特异性引物, 将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上, 构建重组质粒repFastBac HTb-18, 转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18).在Cellfectin作用下, 将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒, 然后将重组杆状病毒感染sf9, 感染后不同时间收获sf9细胞, 进行SDS-PAGE电泳, 分析表达情况; 用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析; 将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验, 对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验, 初步分析表达产物的生物学活性.结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 经薄层凝胶扫描分析证实, 表达量占总蛋白的21.3%; Western blot分析证明, 在相对分子质量(Mr)约为26000处有一条特异性条带.生物学活性分析表明, 纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖, 促进IFN-γ的产生.结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 表达产物具有良好的生物学活性.
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