多功能转录因子CTCF重组质粒构建及其表达鉴定

来源 :四川大学学报：医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hdydrd

【摘要】

：

目的构建人CTCF cDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体，纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板，分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-

【作者】

：

蒋磊覃扬孙芝琳武静杨文理张军哲

【机构】

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四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室

【出处】

：

四川大学学报：医学版

【发表日期】

：

2009年1期

【关键词】

：

CTCF结合因子融合蛋白表达 CTCF binding factor Fusion protein Expression

【基金项目】

：

国家自然科学基金（批准号30470792）资助

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目的构建人CTCF cDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体，纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板，分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF，pGEX-4T-2-CTCF-N，pGEX-4T-2-CTCF-Zn，pGEx-4T-2-CTCF-C，转化大肠杆菌BL21，酶切、测序鉴定；优化IPTG诱导表达条件，并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF，CTCF-N，CTCF-Zn，CTCF进行Far-Western blot鉴定。结果重组质

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