【摘 要】
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为研究链霉菌中的同源整合频率和机制,采用不能在链霉菌中复制的大肠杆菌质粒转化链霉菌Streptomyces lincolnensis B48.质粒pYYE04a1上携带的被硫链丝菌素抗性基因灭活的林
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为研究链霉菌中的同源整合频率和机制,采用不能在链霉菌中复制的大肠杆菌质粒转化链霉菌Streptomyces lincolnensis B48.质粒pYYE04a1上携带的被硫链丝菌素抗性基因灭活的林可霉素生物合成基因与染色体DNA上的同源基因发生重组,经过低抗筛选,得到两个突变子S.lincolnensis YY1和S.lincolnensis YY2.进一步以硫链丝菌素抗性基因为探针杂交染色体DNA Sma I片段,S.lincolnensis YY1和S.lincolnensis YY2都得到1.5kb的阳性条带;而以缺失的lacZ基因为探针杂交染色体DNA HindⅢ和Sma I联合酶切片段,只有S.lincolnensis YY2得到4.4kb的阳性条带.Southern杂交结果表明S.lincolnensis YY1是由同源交换或二次重组产生的,而S.lincolnensis YY2为同源整合的结果.为验证同源整合子上大肠杆菌复制子和氨苄抗性基因的存在,用SphI酶切染色体DNA后连接,连接液转化E.coli JM83感受态细胞,在氨苄抗性板上得到2个转化子,命名为pSLE1.对其进行酶切鉴定的结果表明它是转化质粒pYYE04a1的一部分.
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