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目的：建立一种简捷的分离培养和纯化大鼠牙囊细胞的方法。方法：分离出生后6dSD大鼠上下颌第一和第二磨牙完整牙胚，剥离牙囊和成釉器，剪碎后酶消化并混合培养，再利用多次差速传代纯化牙囊细胞。结果：原代细胞为牙囊细胞和成釉器细胞混合生长，差速传代培养到第4代可获得纯化的牙囊细胞。倒置显微镜下观察牙囊细胞呈长梭形或三角形，免疫组化染色抗波形丝蛋白阳性，抗角蛋白阴性。结论：利用多次差速传代可从混合培养的原代细胞中获得纯化的牙囊细胞。