【摘 要】
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目的 在大肠杆菌中构建脱水四环素诱导的Targetron基因打靶系统,为微生物遗传改造提供可控的新型Tar-getron基因打靶工具.方法 首先,分析大肠杆菌对脱水四环素的敏感性,筛选
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院微生物学教研室,贵州贵阳550025;贵州医科大学医学检验学院,贵州贵阳550004;贵州医科大学基础医学院微生物学教研室,贵州贵阳550025;遵义市第一人民医院(遵义医科大学
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目的 在大肠杆菌中构建脱水四环素诱导的Targetron基因打靶系统,为微生物遗传改造提供可控的新型Tar-getron基因打靶工具.方法 首先,分析大肠杆菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度.其次,以绿色荧光蛋白为报告基因,构建脱水四环素诱导的荧光蛋白报告系统,检测其诱导效果.然后,将上述验证的脱水四环素诱导系统与Ⅱ型内含子打靶元件组合,构建脱水四环素诱导型Targetron系统.最后,以大肠杆菌pyrF79a、lacZ1063a和lacZ635s三个基因位点为例,分析其在大肠杆菌中的打靶效率.结果 脱水四环素诱导系统能够在大肠杆菌中诱导Targetron元件表达,使用0.2 μg/ml脱水四环素诱导3 h该诱导型Targetron系统在pyrF79a、lacZ1063a和lacZ635s三个位点的打靶效率分别为(31.9％±5.2％)、(56.3％±10.8％)和(8.2％±3.6％).结论 在大肠杆菌中成功构建脱水四环素诱导的Tar-getron 基因打靶系统,为微生物基因工程改造提供了良好的遗传工具.
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