人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

来源 :中国生物工程杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：plutoBSD

【摘要】

：

利用重叠PCR技术在体外拼接IFNβ和HSA基因，将得到的融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中，置于启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下，分泌表达融合蛋白IFNβ-HSA。重

【作者】

：

雷楗勇张莲芬杨健良金坚

【机构】

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江南大学生物工程学院教育部工业微生物重点实验室

【出处】

：

中国生物工程杂志

【发表日期】

：

2006年7期

【关键词】

：

Β干扰素巴斯德毕赤酵母融合蛋白 Interferon β Pichia pastoris Fusion protein

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利用重叠PCR技术在体外拼接IFNβ和HSA基因，将得到的融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中，置于启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下，分泌表达融合蛋白IFNβ-HSA。重组质粒pPIC9K-IFNβ-HSA经SalI线性化，电击转化毕赤酵母KM71，经CA18筛选得到高拷贝转化子。PCR鉴定后，用甲醇诱导表达，SDS-PAGE和Western blot分析表达的融合蛋白IFNβ-HSA，表明该蛋白分子量约为90kDa，且具有HSA的抗原性；用细胞病变抑制法测定发酵液上清中融合蛋白的干

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