【摘 要】
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[目的]研究榅桲果实木质化与CAD基因的关系.[方法]基于GenBank报道的近缘物种CAD基因cDNA序列,应用Primer Premier 5.0软件设计PCR扩增引物.提取榅桲总RNA,经反转录后合成cDN
【机 构】
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新疆农业职业技术学院,新疆昌吉,831100新疆农业科学院园艺作物研究所,乌鲁木齐,830091;
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[目的]研究榅桲果实木质化与CAD基因的关系.[方法]基于GenBank报道的近缘物种CAD基因cDNA序列,应用Primer Premier 5.0软件设计PCR扩增引物.提取榅桲总RNA,经反转录后合成cDNA,应用RT-PCR方法成功扩增出CAD基因片段并克隆到pMD18-T载体.通过DNAstar软件进行同源序列比对,ClustalX结合MEGA4.1软件构建系统进化树,采用Protparam在线程序分析蛋白质的理化性质,用DNAstar的Protean程序预测二级结构.通过间苯二酚染色鉴定果肉发育时期木质素的积累程度,并利用RT-qPCR对CAD基因在发育期时期的表达规律进行检测.[结果]榅桲CAD基因其开放阅读框(ORF)序列为1 071 bp,编码356个氨基酸,与其他物种序列同源性最高达96％,进化关系上与苹果较近.在果实6个发育时期,木质素积累逐渐降低,而CAD基因表达与果实木质化程度紧密相关,随着木质素合成趋缓呈现一个逐步下调的趋势.[结论]CAD基因是调控榅桲果实木质化的关键基因.
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