STIM1和Orai1在骨肉瘤细胞HOS增殖和凋亡中的作用

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目的:探讨钙库操纵的钙内流( SOCE)组成蛋白STIM1和Orai1蛋白在骨肉瘤细胞系HOS增殖和凋亡中的作用。方法用shRNA干扰技术抑制STIM1和Orai1蛋白的表达。 Western blot测定STIM1和Orai1的蛋白表达;激光共聚焦检测细胞Ca2+内流变化;噻唑蓝( MTT)比色法检测HOS细胞的增殖能力;流式细胞技术检测HOS 细胞的凋亡变化。结果与空白对照组和转染negative-shRNA的对照组相比,转染48 h后STIM1-shRNA 组STIM1蛋白的表达均明显降低( P<0.01),Orai1-shRNA组Orai1蛋白的表达也明显降低。抑制STIM1和Orai1蛋白后,细胞Ca2+内流减少。转染24、48和72 h后,STIM1-shRNA组及Orai1-shRNA组HOS细胞的增殖能力明显下降( P<0.01)。流式细胞检测显示,与control组和negative-shRNA组相比,转染48 h后细胞的周期受到明显抑制,而凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论 STIM1和Orai1在骨肉瘤细胞HOS增殖中有重要作用,抑制STIM1和Orai1蛋白表达可以抑制HOS细胞增殖、促进凋亡。“,”Objective To investigate the role of STIM 1 and Orai1 in the proliferation and apoptosis of HOS osteosarcoma cells .Methods The protein expressions of STIM 1 and Orai1 were inhibited using small RNA interference .The protein expressions of STIM 1 and Orai1 were detected by Western blot .The proliferation of HOS cells was detected by MTT assay .Results Comparing with the control group and the transfection-negative shRNA group , 48 hours after ransfection , the STIM1 protein expression of the STIM1-shRNA group was significantly decreased; the Orai1 protein expression of the Orai1-shRNA group was also obviously decreased .24 h, 48h and 72 h after the transfection , the cellproliferation of the STIM1-shRNA group and Orai1-shRNA group was significantly decreased (P<0.05). The flow cytometry showed that , comparing with the control group and the negative-shRNA group, 48 h after transfection , the cell cycles were significantly inhibited , while the apoptosis levels were significantly increased ( P<0.05 ) .Conclusion STIM1 and Orai1 have an important role in the HOS osteosarcoma cell proliferation:inhibition of the STIM1 and Orai1 proteins can inhibit the proliferation and apoptosis of the HOS cells .
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