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建立了同时测定香兰素和邻位香兰素的高效液相色谱法。考察了流动相组成、柱温等因素对分析效率的影响。在流动相为5％乙酸-乙腈（60：40，体积比），流速1．0mL／min，柱温25℃的优化条件下，香兰素和邻位香兰素可在5min内实现分离。测定结果表明，香兰素和邻位香兰素在10～240mg／L范围内线性关系良好，相关系数均为0．9997；方法的检出限（S／N=3）分别为0．06、0．02mg／L；样品的加标回收率为99％～102％，相对标准偏差为0．2％～0．6％。该方法操作简单、快速，用于实际样品的分析，结果