【摘 要】
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为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEIIb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵栽体.根据CDD和NCBI对SBEIIb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEIIb的功
【机 构】
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中国农业科技东北创新中心,吉林农业大学生命科学学院
【基金项目】
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吉林省博士后科研项目启动经费资助;
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为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEIIb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵栽体.根据CDD和NCBI对SBEIIb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEIIb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体 pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接.构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵栽体 pGBKT7-SBEIIb-X对酵母菌AH109没有毒性作用；转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/ X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了 pGBKT7-SBEIIb-X具有自激活宿主菌AH109的作用.构建的酵母双杂交诱饵栽体pGBKT7- SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEIIb与其互作蛋白的作用位点奠定基础.
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