【摘 要】
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目的探讨自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中EBV DNA载量的方法学性能。方法评价自动核酸提取实时荧光定量PCR方法的线性范围、灵敏度、精密度及抗干扰等方法
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目的探讨自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中EBV DNA载量的方法学性能。方法评价自动核酸提取实时荧光定量PCR方法的线性范围、灵敏度、精密度及抗干扰等方法学性能,比较自动核酸提取法和煮沸提取法的相关性。用该方法检测152例EB病毒感染儿童的全血及血浆中的EBVDNA载量,比较分析全血与血浆中的EBVDNA载量关系。结果本法的线性范围为5×102~5×108Copies/ml,检测灵敏度为500 Copies/ml。批内CV为3.78%~4.57%,批间CV为6.35%~7.56%,总CV为7.24%~8.62%。肝素、胆红素、溶血对本检测方法均无干扰。EBVDNA载量在5×103~5×108Copies/ml范围内,本法()与煮沸提取法()的相关性良好(=0.924+0.873,2=0.900,<0.01),结果相差在1.0 logCopies/ml以内。80例EB病毒活动性感染组儿童,全血EBV DNA阳性率60%,血浆EBV DNA阳性率25%,全血EBV DNA阳性率高于血浆(=0.016);72例EBV非活动性感染组全血EBV DNA阳性阳性率5.6%,血浆EBV DNA阳性率0。活动性感染组全血EBV DNA阳性率高于非活动性感染组(<0.01)。结论自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中的EBV DNA载量,具有灵敏高、抗干扰能力强、定量准确、操作简便的优点,适合临床实验室常规开展。
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