人脂肪来源的成体干细胞体外向软骨细胞诱导分化的研究

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目的 研究人脂肪来源的成体干细胞(ADSC)体外能否向软骨细胞成功分化,探讨其作为组织工程软骨种子细胞的可行性.方法 自成人皮下取少量脂肪组织,经机械剪切及Ⅰ型胶原酶消化后获取成体干细胞,体外培养扩增;流式细胞仪鉴定细胞表型;第5代细胞采取离心管中微块法培养,培养液中加入转化生长因子(hTGF-β2)等诱导剂诱导其向软骨细胞分化;诱导14 d的细胞团经消化后获得单细胞悬液,接种于玻片上行形态学观察,甲苯胺兰、免疫组织化学染色及逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)用以鉴定软骨细胞表型.结果 从人体皮下脂肪组织中可成功分离到ADSC,细胞可于体外大量扩增;第5代细胞大多数表达CD29、CD90,而CD14、CD45抗原表达阴性;RT-PCR结果提示诱导后的细胞可表达黏多糖(GAG)及Ⅱ型胶原,诱导后的细胞块分离成单个细胞后可见其形态较诱导前发生明显变化,甲苯胺兰染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色为阳性.对照组未加诱导因子的细胞则未能观察到上述变化.结论 成人皮下脂肪组织中可分离到大量ADSC;ADSC可在体外成功诱导向软骨细胞分化;ADSC有望作为组织工程软骨构建中的种子细胞。

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