目的 建立一种测定血浆活化vWF的双抗体夹心方法 .方法 利用骆马来源的抗-活化vWF抗体(一抗),辣根过氧化物酶标记兔抗人vWF多克隆抗体(二抗)建立双抗体夹心方法 .随机选取健康人66名,糖尿病患者30例、vWD-2B 10例、先天性血栓性TTP5例、后天性血栓性血小板减少性紫癜13例、疟疾13例进行血浆活化vWF的测定.以基于AU/vWFa-11抗体酶标方法 测得的代表活化vWF浓度的A值与vWF抗原浓度的比值来表示活化vWF.同时在62、125、250μg/L 3个不同的vWF抗原浓度情况下测定代表活化vWF浓度的A值并使用GraphPad Prism 4软件处理数据,在达到良好线性回归的前提下计算样本斜率/标准血浆斜率比值即血浆活化vWF.根据该数值的大小表示血浆vWF的活化程度.结果 用双抗体夹心测定血浆活化vWF法检测高、中、低浓度3份不同标准品的批内CV分别为4.21%、4.98%、6.32%;批间CV分别为6.34%、7.02%、7.69%.健康对照组血浆活化血友病因子测定值为0.74±0.35,健康对照组中男性与女性的血浆vWF抗原浓度分别为(7.29±5.15)×10~3μg/L和(9.42±4.67)×10~3μg/L,活化vWF分别为0.74±0.34和0.73±0.35,两组的差异均无统计学意义(t分别为1.352和0.04,P均＞0.05).在不同年龄组间,≥40岁组血浆vWF抗原浓度[(10.64±5.39)×10~3μg/L]高于＜40岁组[(6.11±2.84)×10~3μg/L],差异有统计学意义(t=8.24,P＜0.01);而血浆活化vWF在两年龄组间差异无统计学意义[≥40岁组0.70±0.38,＜40岁组0.78±0.29,t:1.02,P＞0.05].而糖尿病组、vWD-2B、先天性TTP、后天性TTP、疟疾等各疾病组血浆活化vWF水平比健康对照组明显增高(1.07±0.66、6.52±1.30、5.82±1.47、1.53±0.11、2.17±0.53),差异有统计学意义(F=10.23,P＜0.01).结论 成功地建立了一种测定血浆活化vWF的双抗体夹心方法 ,可以用来表示疾病状态时vWF的真实活化状态,为分析引起血浆活化vWF升高的机制提供重要依据。