降糖保肾养阴汤对实验性糖尿病肾病的保护作用研究

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  糖尿病肾病是糖尿病的常见并发症,我们在临床应用降糖保肾养阴汤治疗糖尿病肾病取得较好疗效,为进一步探讨其作用机理,观察了该方对糖尿病及其糖尿病肾病的保护作用,报告如下:
  1、材料与方法
  1、1 实验动物:昆明小鼠,雌雄各半,体重20±2g;Wistar大鼠,雌雄各半,体重200±20g,由河北医科大学实验动物中心提供。适应性喂养自由1周,自由飲食、饮水。
  1、2 药物与试剂:降糖保肾养阴汤由邢台医学高等专科学校第二附属医院中药房提供,优降糖,每片2.5mg,中山市三才医药集团有限公司;四氧嘧啶,Sigma公司;盐酸肾上腺素,福建省福州制药厂;链脲菌素,上海第三化学试剂厂。
  1、3 仪器:721型分光光度仪,上海第三分析仪器厂;全自动生化分析仪,
  1、4 对小鼠肾上腺素性高血糖的影响
  小鼠50只,随机分为5组,正常组(生理盐水组),模型组,优降糖对照组(100mg/kg),降糖保肾养阴汤低剂量组(1.44g/kg),降糖保肾养阴汤高剂量组(5.76g/kg)。各组按0.2ml/10g灌胃给药,每天1次,连续5天,生理盐水组与模型组灌胃给予同体积生理盐水。于末次给药前,各组动物禁食不禁水12小时,末次给药后1小时,除生理盐水组尾静脉注射等体积生理盐水外,其余各组均按0.2ml/10g尾静脉iv盐酸肾上腺素溶液240ug/kg,30分钟后摘眼球取血测定血糖,结果见表1。
  1、5 对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响
  取禁食不禁水32小时的小鼠,以0.2ml/10g尾静注 80mg/kg 四氧嘧啶生理盐水溶液,72小时后(禁食不禁水12小时)眼底静脉丛取血测定血糖作为给药前血糖值,血糖值≥20mmol/L的小鼠,随机分为5组,生理盐水组,模型组,优降糖对照组(100mg/kg),降糖保肾养阴汤低剂量组(1.44g/kg)降糖保肾养阴汤高剂量组(5.76g/kg)。各组按0.2ml/10g灌胃给药,生理盐水组与模型组灌胃给予同体积生理盐水。每日1次,连续7天,于末次给药2小时后,剪尾取血测定血糖值。统计结果表2。
  1、6 对链脲菌素糖尿病肾病大鼠的影响
  40只大鼠尾静脉注射链尿菌素60mg/kg,3天后尿糖在+++以上,确定为糖尿病肾病模型,在注射后2周可形成糖尿病肾病早期阶段,两周后糖尿病大鼠尿蛋白在15ug/ml以上,确定为糖尿病肾病模型。模型建立后,降糖保肾养阴汤低剂量组(1.44g/kg)、降糖保肾养阴汤高剂量组(5.76g/kg)。各组按0.2ml/10g灌胃给药,每天1次,连续8周,生理盐水组与模型组灌胃给予同体积生理盐水。
  第9周时,大鼠置于代谢笼,先禁食18小时,禁水3小时,搜集24小时尿液,测定24小时尿蛋白;摘眼球取血,测血糖。结果见表3。
  1、7 统计学处理 所有数据采用x±s表示,以方差齐性t检验进行统计处理。
  2、结果
  2、1 降糖保肾养阴汤对小鼠肾上腺素性高血糖的影响
  结果表明,降糖保肾养阴汤高、低剂量组均比模型组血糖值明显降低,具有显著差异。结果见表1。
  与模型组比较;*p<0.05 **p<0.01
  2、2 降糖保肾养阴汤对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响
  结果表明,给药后降糖保肾养阴汤高、低剂量组均比模型组血糖值明显降低,具有显著差异。结果见表2。
  表2、降糖保肾养阴汤对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响 (x±s)(mmol/L)
  与模型组比较; **p<0.01
  2、3 降糖保肾养阴汤对糖尿病肾病模型大鼠的影响
  结果表明,降糖保肾养阴汤高、低剂量组均比模型组血糖值、24h尿蛋白明显降低,具有显著差异。结果见表3。
  表3、降糖保肾养阴汤对糖尿病肾病模型大鼠的影响(x±s)
  与模型组比较;*P〈0.05 **P〈0.01
  3、讨论
  实验结果表明,降糖保肾养阴汤对不同糖尿病以及糖尿病肾病模型动物血糖均有一定抑制作用,其中,四氧嘧啶进入体内后,能被β细胞摄取,产生氧自由基破坏β细胞结构,导致细胞坏死,阻碍胰岛素分泌,引起高血糖。而持续的高血糖对糖尿病肾病的发生发展起着重要作用,本研究结果显示,降糖保肾养阴汤对不同模型高血糖具有明显的降低血糖作用,而且可以降低尿蛋白,表明降糖保肾养阴汤可能通过不同的途径降低血糖延缓糖尿病肾病的发生发展,达到治疗作用。
  现代药理研究表明,降糖保肾养阴汤方中,黄芪具有可调节机体免疫功能,能扩张血管,具有较持久的降压作用,并可升高血清白蛋白,降低胆固醇,消除蛋白尿;当归可扩张血管,改善微循环,降低血小板聚集,降血脂,改善肾小球滤过功能,减轻肾损害;益母草可改善微循环,改善脂代谢,降低血糖;枸杞具有明显的降糖作用,女贞子可降糖降脂,改善微循环,各药配合,结合我们的动物实验结果证实了该药的治疗作用。
  参考文献:
  1、中华人民共和国卫生部颁布.中药新药治疗消渴病(糖尿病)的临床研究指导原则.1987:215—217 .
  2、中华人民共国卫生部颁布.中药新药治疗慢性肾小球肾炎的临床研究指导原则.1993:133-136.
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