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【摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定消化胶囊中橙皮苷的含量。方法：采用十八烷基键合硅胶色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈-水（20∶80）为流动相，流速为1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：284nm。结果：橙皮苷含量在10.15～81.20μg（r=0.9995）范围内与峰面积呈良好线性关系；平均回收率为98.50%（RSD为0.46%）。结论：本方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于消化胶囊中橙皮苷的含量测定。
【关键词】消化胶囊；橙皮苷；高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2016）07-0019-02
Abstract：Objective To establish high performance liquid chromatography （HPLC） determination of hesperidin in digestive capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （4.6mm×250mm，5μm）； With acetonitrile - water （0） were as mobile phase， flow rate of 1.0ml/min； Column temperature：30℃； detection wavelength 284 nm.Results Concentration of hesperidin in 10.15～81.20μg （r=0.9995） range and peak area showed a good linear relationship. The average recovery rate was 98.5% （RSD was 0.51%）.Conclusion This method is simple and reliable， rapid， accurate and stable results and can be used for determination the content of hesperidin in digestive capsule.
Keywords：Digestive capsule； hesperidin； HPLC
消化胶囊是曲靖市第一人民医院的医院制剂，由陈皮、炒枳壳、厚朴、木香等九味药经过粉碎、过筛、混合后装入胶囊制得。临床用于治疗胸腹胀满、食欲不化、呕吐腹泻腹痛等症状。消化胶囊质量标准[1]中以两项薄层色谱来鉴别其中部分药材，未建立制剂中中药成分含量测定方法。处方中陈皮、炒枳壳两味药均含橙皮苷[2]，本文采用高效液相色谱法对其中橙皮苷进行含量测定，为有效控制“消化胶囊”质量提供可靠且简便易行的方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Agilent1260型高效液相色谱仪（包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD检测器，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；PURELAB Flex 3超纯水仪（英国ELGA公司）。
1.2 材料 橙皮苷对照品（批号：110721-201115，中国食品药品检定研究院）；消化胶囊（批号：201409102、20140302、201109151，曲靖市第一人民医院）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水（20∶80）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：284nm；进样量10μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液制备 取本品装量差异项下内容物，混匀，取约0.2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声（频率：45KHz；功率：240W）60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.2.2 对照品储备液的制备 精密称取橙皮苷对照品20.30mg置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（作为加标溶液，浓度为1.015mg/ml），再精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，摇匀，制得浓度为0.203mg/ml的对照品储备液。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按原处方制备不含炒枳壳、陈皮的阴性样品，并按“2.2.1”项下制备阴性样品溶液。
2.3 专属性试验 将阴性样品溶液按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。色谱图中在橙皮苷的保留时间处，无其它成分干扰。
2.4 线性关系的考察 分别精密吸取“2.2.2”项下橙皮苷对照品储备液0.5、1、2、3、4ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在“2.1”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得橙皮苷的回归方程Y=16.9963X+9.0488（r=0.9995）。结果表明：橙皮苷含量在10.15～81.20μg范围内具有良好线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取同一质量浓度的橙皮苷对照品溶液在“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，RSD为0.8%。
2.6 重复性试验 取同一批消化胶囊5份，按“2.2.1”项下的方法处理，考察方法的重复性。供试品中橙皮苷含量RSD为1.2%。 2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液（批号：201409102），分别于0、2、4、8、12、24h按“2.1”项下色谱条件进行分析。结果橙皮苷的RSD为1.3%。表明供试品溶液在室温下放置24h基本稳定。
2.8 回收率试验 分别取已知含量的同一批消化胶囊（批号201409102）约0.1g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度为1.015mg/ml）1ml，按“2.2.1”项下的方法处理，制备供试液，分别测定，计算回收率。平均回收率为98.50%，RSD为0.46%。见表1。
2.9 样品含量测定 取不同批号的供试品3批按“2.2.1”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算橙皮苷含量。见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择 实验先后试用文献[3]中甲醇-醋酸-水不同比例作为流动相测定，对照品及样品中橙皮苷的峰形及与其他杂质的分离效果均不满意。结果选用文献[4]的乙腈-水（20∶80）为流动相，能得到对称性较好的橙皮苷峰，并且样品中橙皮苷与其它杂质能很好地分离，故选用乙腈-水（20∶80）为流动相。
3.2 提取方法的选择 ①提取方法的确定：试验比较了甲醇水浴回流提取和超声提取，结果回流提取杂质较多，超声处理简便快速，杂质较少，且加标回收率较好，故选用超声提取。②超声时间的确定：精密称取样品（批号201409102）5份，每份约0.2g，精密加入甲醇50ml，分别超声（频率：45KHz；功率：240W）处理20、30、50、60、70 min，结果超声50 min后，橙皮苷含量基本不变，证明样品超声处理50min后，能将样品中的橙皮苷提取完全，所以超声（频率：45KHz；功率：240W）时间确定为60 min。
3.3 结论 该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于消化胶囊中橙皮苷的含量测定。
参考文献
[1] 云南省食品药品监督管理局.云南医院制剂标准[S].云南：云南科学技术出版社，2005：543.
[2] 吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1996：327-328.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：176-177.
[4] 苏红，刘淇，薛平.橘叶中陳皮苷含量测定[J].中国现代中药，2006（4）：19-20.
（收稿日期：2016.01.18）
【关键词】消化胶囊；橙皮苷；高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2016）07-0019-02
Abstract：Objective To establish high performance liquid chromatography （HPLC） determination of hesperidin in digestive capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （4.6mm×250mm，5μm）； With acetonitrile - water （0） were as mobile phase， flow rate of 1.0ml/min； Column temperature：30℃； detection wavelength 284 nm.Results Concentration of hesperidin in 10.15～81.20μg （r=0.9995） range and peak area showed a good linear relationship. The average recovery rate was 98.5% （RSD was 0.51%）.Conclusion This method is simple and reliable， rapid， accurate and stable results and can be used for determination the content of hesperidin in digestive capsule.
Keywords：Digestive capsule； hesperidin； HPLC
消化胶囊是曲靖市第一人民医院的医院制剂，由陈皮、炒枳壳、厚朴、木香等九味药经过粉碎、过筛、混合后装入胶囊制得。临床用于治疗胸腹胀满、食欲不化、呕吐腹泻腹痛等症状。消化胶囊质量标准[1]中以两项薄层色谱来鉴别其中部分药材，未建立制剂中中药成分含量测定方法。处方中陈皮、炒枳壳两味药均含橙皮苷[2]，本文采用高效液相色谱法对其中橙皮苷进行含量测定，为有效控制“消化胶囊”质量提供可靠且简便易行的方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Agilent1260型高效液相色谱仪（包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD检测器，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；PURELAB Flex 3超纯水仪（英国ELGA公司）。
1.2 材料 橙皮苷对照品（批号：110721-201115，中国食品药品检定研究院）；消化胶囊（批号：201409102、20140302、201109151，曲靖市第一人民医院）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水（20∶80）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：284nm；进样量10μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液制备 取本品装量差异项下内容物，混匀，取约0.2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声（频率：45KHz；功率：240W）60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.2.2 对照品储备液的制备 精密称取橙皮苷对照品20.30mg置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（作为加标溶液，浓度为1.015mg/ml），再精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，摇匀，制得浓度为0.203mg/ml的对照品储备液。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按原处方制备不含炒枳壳、陈皮的阴性样品，并按“2.2.1”项下制备阴性样品溶液。
2.3 专属性试验 将阴性样品溶液按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。色谱图中在橙皮苷的保留时间处，无其它成分干扰。
2.4 线性关系的考察 分别精密吸取“2.2.2”项下橙皮苷对照品储备液0.5、1、2、3、4ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在“2.1”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得橙皮苷的回归方程Y=16.9963X+9.0488（r=0.9995）。结果表明：橙皮苷含量在10.15～81.20μg范围内具有良好线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取同一质量浓度的橙皮苷对照品溶液在“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，RSD为0.8%。
2.6 重复性试验 取同一批消化胶囊5份，按“2.2.1”项下的方法处理，考察方法的重复性。供试品中橙皮苷含量RSD为1.2%。 2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液（批号：201409102），分别于0、2、4、8、12、24h按“2.1”项下色谱条件进行分析。结果橙皮苷的RSD为1.3%。表明供试品溶液在室温下放置24h基本稳定。
2.8 回收率试验 分别取已知含量的同一批消化胶囊（批号201409102）约0.1g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度为1.015mg/ml）1ml，按“2.2.1”项下的方法处理，制备供试液，分别测定，计算回收率。平均回收率为98.50%，RSD为0.46%。见表1。
2.9 样品含量测定 取不同批号的供试品3批按“2.2.1”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算橙皮苷含量。见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择 实验先后试用文献[3]中甲醇-醋酸-水不同比例作为流动相测定，对照品及样品中橙皮苷的峰形及与其他杂质的分离效果均不满意。结果选用文献[4]的乙腈-水（20∶80）为流动相，能得到对称性较好的橙皮苷峰，并且样品中橙皮苷与其它杂质能很好地分离，故选用乙腈-水（20∶80）为流动相。
3.2 提取方法的选择 ①提取方法的确定：试验比较了甲醇水浴回流提取和超声提取，结果回流提取杂质较多，超声处理简便快速，杂质较少，且加标回收率较好，故选用超声提取。②超声时间的确定：精密称取样品（批号201409102）5份，每份约0.2g，精密加入甲醇50ml，分别超声（频率：45KHz；功率：240W）处理20、30、50、60、70 min，结果超声50 min后，橙皮苷含量基本不变，证明样品超声处理50min后，能将样品中的橙皮苷提取完全，所以超声（频率：45KHz；功率：240W）时间确定为60 min。
3.3 结论 该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于消化胶囊中橙皮苷的含量测定。
参考文献
[1] 云南省食品药品监督管理局.云南医院制剂标准[S].云南：云南科学技术出版社，2005：543.
[2] 吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1996：327-328.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：176-177.
[4] 苏红，刘淇，薛平.橘叶中陳皮苷含量测定[J].中国现代中药，2006（4）：19-20.
（收稿日期：2016.01.18）