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摘 要：哈伯德肉种鸡对油苗免疫的应激反应较大，尤其多次的新城疫和禽流感油苗免疫对其影响后果更为严重。因此本试验通过在开产前对哈伯德肉种鸡减少1次鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗和重组禽流感病毒（H5+H7）灭活疫苗接种以及对油苗的免疫周龄进行调整优化，通过血清学方法检测新城疫、禽流感、传染性支气管炎抗体效价并进行抗体效价差异显著性分析，评估油苗减负对哈伯德肉种鸡免疫效果的影响。试验结果表明，试验组的各种抗体效价与对照组相比，抗体效价差异不显著（P>0.05）。
关键词：肉种鸡;油苗;减负免疫;效果评估
我公司实验室多年来通过血凝和血凝抑制试验检测新城疫、禽流感的抗体效价，合理有效地监控新城疫和禽流感疫苗免疫的效果评估和抗体维持，近年来未发生一例新城疫或禽流感疫情。哈伯德肉种鸡对油苗注射免疫的应激反应较大，尤其多次的新城疫和禽流感油苗免疫造成的应激反应更为严重。在可控条件下，我公司针对肉种鸡的健康养殖提出了新城疫和禽流感疫苗油苗免疫减负项目。为此，通过开产前对哈伯德肉种鸡开展新城疫和禽流感油苗免疫减少1次的试验，以对免疫后鸡群的抗体滴度进行血清学检测来评估油苗减负对肉种鸡免疫效果的影响。
1 试验材料
1.1 新支流、禽流感油苗免疫调整 哈伯德肉种鸡油苗免疫减负的疫苗为鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗（简称新支流）和重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（简称禽流感）。
试验组鸡群：接种新支流油苗和禽流感油苗，在产蛋前减少1次免疫，只在开产前免疫4次，并对免疫时间进行了调整优化;对照组鸡群：采用原来的免疫程序，在产蛋前免疫5次。详见表1新城疫、禽流感油苗免疫程序调整方案。
1.2 鸡群分组 选择哈伯德肉种鸡场区16000羽肉种鸡随机分为试验组和对照组，试验组免疫4次新支流和禽流感油苗，对照组免疫5次新支流和禽流感油苗。免疫剂量和接种方法：2周龄，接种油苗0.3 mL/只，颈部皮下注射;3周龄，接种油苗0.3 mL/只，肌肉注射;其他周龄，接种油苗0.5 mL/只，肌肉注射，不同疫苗按照左、右胸肌分开注射接种。
试验鸡群是同一种群来源的哈伯德肉种鸡，按照相同的饲养管理模式在同一场区进行管理，每个舍的饲养规模为8000羽。其他疫苗按照常规免疫程序执行。
2 试验方法
2.1 试验方法 新城疫、禽流感的抗体使用血凝和血凝抑制试验方法检测抗体效价，参照GB/T14926.53-2001血凝试验，GB/T14926.54-2001血凝抑制试验。检测抗体分别为油苗免疫后的ND，H9，H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）的抗体滴度。传染性支气管炎（IB）抗体通过ELISA检测其疫苗免疫效价，采用ELISA试剂盒并按照试剂盒说明书操作方法检测。
2.2 血清采集 采集种鸡群1、4、7、10、13、16、19、22、26、30、34、37周龄的血清，与免疫周龄相同的需在免疫之前采集血清。每组按照64羽的采样数量随机抽样，翅静脉采血，标明场区、样品数、种鸡品种、周龄和采血时间，待析出血清后及时分离血清冻存，对所有的试验血清同一时间进行ND、H9、H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）的抗体检测。IB的检测选取1、4、16、19、22、26、30周的血清进行ELISA检测IB效价。
2.3 数据的统计分析 将测定的ND、H9、H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）和IB抗体的数据，用Excel软件进行数据处理，并用SPSS Statistics 19.0数据统计分析软件中进行方差分析，试验结果以“平均值±标准误差”形式表示，以P<0.05作为差异显著性判定标准。
3 试验结果及分析
3.1 新城疫抗体的检测结果 试验鸡群血清中ND抗体滴度（Log2）的结果见表2。
由表2可知，试验组的抗体滴度在7周显著低于对照组（P<0.05），其他周龄的抗体滴度差异不显著（P>0.05）。试验组在4、10、13、19周的抗体滴度高于对照组，16、22、26、30、34、37周的抗体滴度低于对照组。在26周之后，试验组抗体水平下降速度要快于对照组。
3.2 禽流感H9抗体的检测结果 血清的禽流感H9抗体滴度（Log2）的结果见表3。
由表3可知，试验组在7、10、13、16、26、30、34、37周的抗体滴度低于对照组，19、22周的抗体滴度高于对照组，两组间差异不显著（P>0.05）。试验组H9的抗体滴度在34周下降比对照组稍快。
3.3 禽流感 H5（Re-11）和H5（Re-12）抗体的检测结果 血清中禽流感H5抗体滴度（Log2）的结果见表4。
由表4可知，试验组H5（Re-11）的抗体滴度在10、13、16、37周稍高于对照组，在4、7、19、22、26、30、34周低于对照组，两组间差异不显著（P>0.05）。试验组H5（Re-12）的抗体滴度在26周为10.65，低于对照组的11.45，差异显著（P<0.05）;在4、13、16周的抗体滴度高于对照组，差异不显著（P>0.05）。26周后，与对照组相比，H5（Re-12）的抗体水平下降幅度要比H5（Re-11）的大。
3.4 禽流感H7（Re-2）抗体的检测结果 血清中禽流感H7（Re-2）抗体滴度（Log2）的结果见表5。
由表5可知，试验组在4、7、10、13、16、19、22、30周的抗体滴度高于对照组，在26、34、37周时低于对照组，差异不显著（P>0.05）。26周之后试验组H7的抗体滴度下降速度比对照组稍快。
3.5 传染性支气管炎（IB）抗体的检测结果 血清中传染性支气管炎抗体效价见表6。
由表6可知，试验组IB抗体效价消长曲线与对照组基本一致，呈现先降后升变化规律，在26周时达到最高。与对照组相比，试验组的IB抗体效价仅在19周高于对照组，其余4、16、26、30周龄的抗体效价均低于对照组，两者间差异不显著（P>0.05）。
4 讨论与结论
4.1 讨论 本次试验通过对哈伯德肉种鸡开产前减少1次油苗免疫接种，并对油苗的免疫周龄进行调整和优化，试验过程采集免疫前后及维持期的血清进行抗体效价检测，以不同周龄的新城疫（ND）、禽流感（H9、H5、H7）、传染性支气管炎（IB）的抗体效价的差异显著性分析进行油苗减负免疫的效果评估。试验结果表明：①ND免疫抗体消长变化，除了试验组7周的抗体滴度显著低于对照组（P<0.05）外，其他周龄的抗体滴度差异不显著（P>0.05）;②H5（Re-12）免疫抗体消长变化，试验组26周的抗体滴度显著低于对照组（P<0.05），其他周龄的抗体滴度差异不显著（P>0.05）;③禽流感H9、H5（Re-11）、H7（Re-2）及IB所有检测周龄的抗体滴度与对照组差异不显著（P>0.05）。因此，哈伯德肉种鸡开产前减少1次免疫接种鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗和重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗的油苗免疫，对肉种鸡相应抗体高度和26周后的维持抗体消退都在预期范围之内，可以有效保护鸡群，维持肉种鸡群健康。
4.2 结论 本试验是新支流和禽流感油苗的免疫减负试验，试验减少了种鸡的油苗接种次数，一方面节约了疫苗费用，另一方面减少了疫苗反应和注射应激。本试验证明，减少1次新城疫、禽流感油苗免疫，機体产生抗体滴度的高度和抗体滴度的维持皆能有效保护鸡群健康。之后，公司推动油苗减负试验扩大试验并验证本次试验结果。
关键词：肉种鸡;油苗;减负免疫;效果评估
我公司实验室多年来通过血凝和血凝抑制试验检测新城疫、禽流感的抗体效价，合理有效地监控新城疫和禽流感疫苗免疫的效果评估和抗体维持，近年来未发生一例新城疫或禽流感疫情。哈伯德肉种鸡对油苗注射免疫的应激反应较大，尤其多次的新城疫和禽流感油苗免疫造成的应激反应更为严重。在可控条件下，我公司针对肉种鸡的健康养殖提出了新城疫和禽流感疫苗油苗免疫减负项目。为此，通过开产前对哈伯德肉种鸡开展新城疫和禽流感油苗免疫减少1次的试验，以对免疫后鸡群的抗体滴度进行血清学检测来评估油苗减负对肉种鸡免疫效果的影响。
1 试验材料
1.1 新支流、禽流感油苗免疫调整 哈伯德肉种鸡油苗免疫减负的疫苗为鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗（简称新支流）和重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（简称禽流感）。
试验组鸡群：接种新支流油苗和禽流感油苗，在产蛋前减少1次免疫，只在开产前免疫4次，并对免疫时间进行了调整优化;对照组鸡群：采用原来的免疫程序，在产蛋前免疫5次。详见表1新城疫、禽流感油苗免疫程序调整方案。
1.2 鸡群分组 选择哈伯德肉种鸡场区16000羽肉种鸡随机分为试验组和对照组，试验组免疫4次新支流和禽流感油苗，对照组免疫5次新支流和禽流感油苗。免疫剂量和接种方法：2周龄，接种油苗0.3 mL/只，颈部皮下注射;3周龄，接种油苗0.3 mL/只，肌肉注射;其他周龄，接种油苗0.5 mL/只，肌肉注射，不同疫苗按照左、右胸肌分开注射接种。
试验鸡群是同一种群来源的哈伯德肉种鸡，按照相同的饲养管理模式在同一场区进行管理，每个舍的饲养规模为8000羽。其他疫苗按照常规免疫程序执行。
2 试验方法
2.1 试验方法 新城疫、禽流感的抗体使用血凝和血凝抑制试验方法检测抗体效价，参照GB/T14926.53-2001血凝试验，GB/T14926.54-2001血凝抑制试验。检测抗体分别为油苗免疫后的ND，H9，H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）的抗体滴度。传染性支气管炎（IB）抗体通过ELISA检测其疫苗免疫效价，采用ELISA试剂盒并按照试剂盒说明书操作方法检测。
2.2 血清采集 采集种鸡群1、4、7、10、13、16、19、22、26、30、34、37周龄的血清，与免疫周龄相同的需在免疫之前采集血清。每组按照64羽的采样数量随机抽样，翅静脉采血，标明场区、样品数、种鸡品种、周龄和采血时间，待析出血清后及时分离血清冻存，对所有的试验血清同一时间进行ND、H9、H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）的抗体检测。IB的检测选取1、4、16、19、22、26、30周的血清进行ELISA检测IB效价。
2.3 数据的统计分析 将测定的ND、H9、H5（Re-11）、H5（Re-12）、H7（Re-2）和IB抗体的数据，用Excel软件进行数据处理，并用SPSS Statistics 19.0数据统计分析软件中进行方差分析，试验结果以“平均值±标准误差”形式表示，以P<0.05作为差异显著性判定标准。
3 试验结果及分析
3.1 新城疫抗体的检测结果 试验鸡群血清中ND抗体滴度（Log2）的结果见表2。
由表2可知，试验组的抗体滴度在7周显著低于对照组（P<0.05），其他周龄的抗体滴度差异不显著（P>0.05）。试验组在4、10、13、19周的抗体滴度高于对照组，16、22、26、30、34、37周的抗体滴度低于对照组。在26周之后，试验组抗体水平下降速度要快于对照组。
3.2 禽流感H9抗体的检测结果 血清的禽流感H9抗体滴度（Log2）的结果见表3。
由表3可知，试验组在7、10、13、16、26、30、34、37周的抗体滴度低于对照组，19、22周的抗体滴度高于对照组，两组间差异不显著（P>0.05）。试验组H9的抗体滴度在34周下降比对照组稍快。
3.3 禽流感 H5（Re-11）和H5（Re-12）抗体的检测结果 血清中禽流感H5抗体滴度（Log2）的结果见表4。
由表4可知，试验组H5（Re-11）的抗体滴度在10、13、16、37周稍高于对照组，在4、7、19、22、26、30、34周低于对照组，两组间差异不显著（P>0.05）。试验组H5（Re-12）的抗体滴度在26周为10.65，低于对照组的11.45，差异显著（P<0.05）;在4、13、16周的抗体滴度高于对照组，差异不显著（P>0.05）。26周后，与对照组相比，H5（Re-12）的抗体水平下降幅度要比H5（Re-11）的大。
3.4 禽流感H7（Re-2）抗体的检测结果 血清中禽流感H7（Re-2）抗体滴度（Log2）的结果见表5。
由表5可知，试验组在4、7、10、13、16、19、22、30周的抗体滴度高于对照组，在26、34、37周时低于对照组，差异不显著（P>0.05）。26周之后试验组H7的抗体滴度下降速度比对照组稍快。
3.5 传染性支气管炎（IB）抗体的检测结果 血清中传染性支气管炎抗体效价见表6。
由表6可知，试验组IB抗体效价消长曲线与对照组基本一致，呈现先降后升变化规律，在26周时达到最高。与对照组相比，试验组的IB抗体效价仅在19周高于对照组，其余4、16、26、30周龄的抗体效价均低于对照组，两者间差异不显著（P>0.05）。
4 讨论与结论
4.1 讨论 本次试验通过对哈伯德肉种鸡开产前减少1次油苗免疫接种，并对油苗的免疫周龄进行调整和优化，试验过程采集免疫前后及维持期的血清进行抗体效价检测，以不同周龄的新城疫（ND）、禽流感（H9、H5、H7）、传染性支气管炎（IB）的抗体效价的差异显著性分析进行油苗减负免疫的效果评估。试验结果表明：①ND免疫抗体消长变化，除了试验组7周的抗体滴度显著低于对照组（P<0.05）外，其他周龄的抗体滴度差异不显著（P>0.05）;②H5（Re-12）免疫抗体消长变化，试验组26周的抗体滴度显著低于对照组（P<0.05），其他周龄的抗体滴度差异不显著（P>0.05）;③禽流感H9、H5（Re-11）、H7（Re-2）及IB所有检测周龄的抗体滴度与对照组差异不显著（P>0.05）。因此，哈伯德肉种鸡开产前减少1次免疫接种鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗和重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗的油苗免疫，对肉种鸡相应抗体高度和26周后的维持抗体消退都在预期范围之内，可以有效保护鸡群，维持肉种鸡群健康。
4.2 结论 本试验是新支流和禽流感油苗的免疫减负试验，试验减少了种鸡的油苗接种次数，一方面节约了疫苗费用，另一方面减少了疫苗反应和注射应激。本试验证明，减少1次新城疫、禽流感油苗免疫，機体产生抗体滴度的高度和抗体滴度的维持皆能有效保护鸡群健康。之后，公司推动油苗减负试验扩大试验并验证本次试验结果。