【摘 要】
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目的 探讨缺氧条件下离体培养的肾小管上皮细胞中纤维化相关标记物结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化,以及缺氧导致肾小管上皮细胞向间充质细胞转化(EMT)的可能性.方法采用无
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目的 探讨缺氧条件下离体培养的肾小管上皮细胞中纤维化相关标记物结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化,以及缺氧导致肾小管上皮细胞向间充质细胞转化(EMT)的可能性.方法采用无糖培养基在无氧环境下培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)4 h,恢复含氧环境后再分别培养6、12、24、48和72 h.用实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹测定各时段细胞中CTGF mRNA和CTGF表达的变化.共聚焦显微镜下观察细胞形态变化.对细胞骨架蛋白--多聚体纤维状肌动蛋白(F-actin)进行标记染色,检测缺氧对其的影响.结果 缺氧后NRK-52E细胞骨架蛋白F-actin的表达增加;NRK-52E细胞的形态由立方上皮向肌纤维母细胞转变;缺氧后,细胞中CTGF mRNA和CTGF的表达明显增高,在恢复含氧环境培养48 h时达到高峰,CTGF mRNA值为29.33±0.21,CTGF的吸光度比值为1.30±0.02.结论缺氧可导致大鼠肾小管上皮细胞中CTGF的表达增加,诱导NRK- 52E细胞发生EMT,CTGF可能是NRK-52E细胞发生EMT和纤维化的关键分子.
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