【摘 要】
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酪氨酸是重要的芳香族氨基酸,自身不仅具有重要的营养价值,也是合成香豆素类化合物和黄酮类化合物的重要前体.文中以实验室前期构建的一株解除了酪氨酸反馈抑制的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae LTH0(ARO4K229L,ARO7G141S,△aro10,△zwfl,△ura3)为出发菌株,异源表达甜菜黄素合成基因DOD和CYP76AD1,使酿酒酵母产生黄色荧光.然后利用紫外诱变和常压室温等离子体(Atmospheric and room temperature plasma,ARTP)
【机 构】
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江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡 214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡214122
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酪氨酸是重要的芳香族氨基酸,自身不仅具有重要的营养价值,也是合成香豆素类化合物和黄酮类化合物的重要前体.文中以实验室前期构建的一株解除了酪氨酸反馈抑制的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae LTH0(ARO4K229L,ARO7G141S,△aro10,△zwfl,△ura3)为出发菌株,异源表达甜菜黄素合成基因DOD和CYP76AD1,使酿酒酵母产生黄色荧光.然后利用紫外诱变和常压室温等离子体(Atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变相结合的方法对上述菌株进行随机诱变,并通过流式细胞仪筛选荧光强度显著提高的突变株.其中突变株LTH2-5-DOD-CYP76AD1在激发波长485 nm、发射波长505 nm处荧光强度为(5941+435) AU/OD,比诱变前提高了8.37倍.对诱变后荧光强度提高较多的14株突变株进行发酵生产酪氨酸,胞外酪氨酸产量最高为26.8 mg/L,比出发菌株提高了3.96倍.进一步异源表达约翰逊黄杆菌Flavobacterium johnsoniae来源的酪氨酸解氨酶FjTAL,对香豆酸产量达到ll9.8mg/L,比出发菌株LTH0-FjTAL提高了1.02倍.
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