【摘 要】
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目的:建立一种基于半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)检测9型腺相关病毒(adeno-associated virus type 9,AAV9)载体制品感染性滴度的方法.方法:利用含AAV2 rep和cap基因的1型单纯疮疹病毒(herpes simplex virus type1,HSV1)做为辅助病毒与梯度稀释的AAV9载体制品共同感染HEK-293细胞,培养48 h后用实时荧光定量PCR(quantitative real-t
【机 构】
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北京工业大学 北京 100124;北京五加和基因科技有限公司 北京 102629;北京五加和基因科技有限公司 北京 102629;北京工业大学 北京 100124
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目的:建立一种基于半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)检测9型腺相关病毒(adeno-associated virus type 9,AAV9)载体制品感染性滴度的方法.方法:利用含AAV2 rep和cap基因的1型单纯疮疹病毒(herpes simplex virus type1,HSV1)做为辅助病毒与梯度稀释的AAV9载体制品共同感染HEK-293细胞,培养48 h后用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)扩增 AAV 特异性反向末端重复序列(inverted terminal repeats,ITR),根据阳性及阴性感染孔数,利用K?rber法计算样品的TCID50.结果:采用携带增强绿色荧光蛋白报告基因的AAV9载体制品确定辅助病毒HSV1-rc最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5,AAV9-101的感染性滴度为1.6×109TCID50/mL.结论:对AAV9载体制品进行感染性滴度检测,且具有可重复性.
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