【摘 要】
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目的建立一种可用于高通量筛选调节连接蛋白43(Cx43)表达药物的方法。方法 PCR法扩增到Cx43启动子,构建Cx43启动子-绿色荧光蛋白(GFP)逆转录表达载体,包装病毒感染肝癌细胞株
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No:81072906;No:30973811);广东省学科建设专项基金(No:K5100007);广东省中医药管理局资助项目(No:20122157)
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目的建立一种可用于高通量筛选调节连接蛋白43(Cx43)表达药物的方法。方法 PCR法扩增到Cx43启动子,构建Cx43启动子-绿色荧光蛋白(GFP)逆转录表达载体,包装病毒感染肝癌细胞株BEL7402建立稳定表达细胞系,接种于96孔板,加促Cx43表达药物全反式维甲酸(ATRA)0、5、10、20、30和40μmol/L处理细胞24、48和72 h,用多功能酶标仪分析绿色荧光强度改变,以此反映药物对Cx43表达的影响,检验该方法能否用于调节Cx43表达药物高通量筛选。结果成功构建Cx43启动子-GFP逆转录表达载体,并获得Cx43启动子驱动GFP稳定表达的BEL7402细胞系,10μmol/L RA组荧光强度明显高于对照组(P<0.01)。结论该Cx43启动子-GFP逆转录表达系,配合多功能酶标仪分析,可用于影响Cx43表达中药的高通量筛选,该方法的建立为筛选调节Cx43表达的药物提供了一种有效的技术手段。
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