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摘要 [目的] 为了研究根际微生态。[方法]采取土壤分离培养分析了施用木霉菌制剂后甜瓜根际土壤中真菌、细菌、放线菌等在甜瓜生长不同时期的数量变化。
[结果] 接种木霉菌制剂后，甜瓜根际不同生长时期的真菌、细菌、放线菌数量明显增多。[结论] 施用木霉菌制剂，能提高土壤中有益微生物的活性，提高甜瓜的抗病性。
关键词 木霉菌制剂；甜瓜；根际微生态
中图分类号 S652 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）15-013-02
Effects of Trichoderma Preparation on Rhizosphere Microecology of Muskmelon
HUANG Yanqing
（Liaoning Vocational College， Tieling， Liaoning 112099）
Abstract [Objective] The research aimed to study the microecology in rhizosphere. [Method] The changes of the number of fungi， bacteria and actinomycetes in muskmelon rhizosphere soil after the use of trichoderma preparation were studied with isolation and cultivation of soil. [Result] The number of of muskmelon rhizosphere increased significantly after inoculted trichoderma preparation. [Conclusion] Trichoderma preparation could improve the beneficial microbial activity in the soil and the disease resistance of muskmelon.
Key words Trichoderma preparation； Muskmelon； Microecology in rhizosphere
作者簡介 黄艳青（1978- ），女，辽宁铁岭人，讲师，硕士，从事农业科研、教育工作。
收稿日期 20150410
土壤微生态是一个植物-土壤-微生物及其环境条件相互作用的生态系统。土壤微生物数量和活性是土壤肥力的一项重要指标。研究表明，土壤微生物能够帮助植物适应养分胁迫环境，改善土壤养分的吸收作用[1]，因此对根际微生态的研究可间接反映土壤的肥力[2]。笔者分析了施用木霉菌制剂后甜瓜根际土壤中真菌、细菌、放线菌等在甜瓜生长不同时期的数量变化。
1 材料与方法
1.1 材料来源
供试品种为改良齐甜一号（生产厂家）；供试木霉菌制剂由辽宁职业学院实验室自主研制。
1.2 供试土壤
试验于2014年4～7月在温室内进行。供试土壤为壤土，肥力中等。除清除杂甜瓜外，一般不施肥，少量灌水，以减少外界对根际微生物的影响。
1.3 试验设计
在甜瓜移栽期，施用稀释后木霉菌制剂（木霉菌的孢子浓度为5×106个/ml），每穴50 ml，以等量清水为对照。每个小区面积约0.5 m2，共8个小区，随机排列，4次重复。在开花坐果期、果实膨大期、果实成熟期，取样。
1.4 取样
根际土壤取样采用洗涤法，即先将2 cm表土去掉，再挖出全部根系，轻轻抖掉多余沾土，用无菌剪刀和镊子将根系剪入灭菌三角瓶中（含有定量石英砂），并加入100 ml无菌水后于振荡机振荡20 min，再将根系用定量无菌水冲洗3次，三角瓶内水溶液摇匀后即成根际土壤悬浮液。每个处理每次重复取4株根系。
1.5 分离培养基的制备
孟加拉红培养基组成为KH2PO4·3H2O 1.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、蛋白胨 5 g、葡萄糖10 g、孟加拉红 0.033 g、琼脂20 g、蒸馏水1 000 ml，pH 6.8，用于分离真菌。
半选择性培养基TSM组成为MgSO4·7H2O 0.2 g、K2HPO4·3H2O 0.9 g、KCl 0.25 g、NH4NO3 1.0 g、葡萄糖 3.0 g、氯霉素 0.25 g、玫瑰红 0.15 g、敌克松可湿性粉剂 0.3 g、PCNB 0.2 g、琼脂 20 g、蒸馏水1 000 ml，用于分离木霉菌。
NA培养基组成为牛肉膏3 g、酵母膏1 g、蛋白胨5 g、葡萄糖 10 g、琼脂 20 g、蒸馏水1 000 ml，pH 7.0～7.2，用于分离细菌。
高氏一号培养基组成为可溶性淀粉20 g、NaCl 0.5 g、KNO31.0 g、K2HPO4·3H2O 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、琼脂 20 g、蒸馏水 1 000 ml，pH 7.2～7.4，用于分离放线菌。
1.6 根际微生物的分离和计数
把洗下的土壤悬浮液逐级稀释（10-2～10-7）。每个培养皿加稀释液0.25 ml，每个处理3次重复。分离真菌和放线菌取10-2～10-4稀释液，分离细菌取10-4～10-7稀释液。在25 ℃恒温箱中培养真菌和细菌，在30 ℃恒温箱中培养放线菌，7 d后调查单菌落数。
将瓶中土壤悬液用烘至恒重的滤纸过滤，然后烘干到恒重。滤纸2次称重的质量差为根际土干重。 2 结果与分析
2.1 根际真菌数量
从图1可以看出，在开花座果期木霉菌制剂处理的甜瓜根際真菌数量与对照无明显差别，到果实膨大期无论是对照还是木霉菌制剂处理的甜瓜根际真菌数量都明显下降，但用木霉菌制剂处理的甜瓜根际真菌数量较对照有所增加，但不明显。在果实成熟期木霉菌制剂处理的甜瓜根际真菌数量都明显升高，达3.52×106 /g，是对照的139倍。从分离到的真菌种类来看，对照中以青霉、曲霉和瓜果腐霉为主，也有一定量的木霉菌，而木霉菌制剂处理后甜瓜根际则以木霉菌为主，青霉、曲霉较多，但瓜果腐霉较少。
2.2 根际细菌数
从图2可以看出，开花座果期甜瓜根际细菌的数量较多，尤其是木霉菌制剂处理的甜瓜根际细菌数量达5.67×109 /g，是对照的1.55倍。在果实膨大期，根际细菌的数量均有所下降，但经木霉菌制剂处理的甜瓜根际细菌数量下降幅度小于对照。到果实成熟期，对照的根际细菌数量上升较高，达到6.74×109 /g，而木霉菌制剂处理的甜瓜根际细菌数量较果实膨大期有所升高，其数量增加不是十分明显。
2.3 根际放线菌数量
从图3可以看出，在甜瓜生长的各个时期，对照放线菌数量变化不大。在开花座果期、果实膨大期，木霉菌制剂处理甜瓜根际放线菌的数量变化与对照基本相同，果实膨大期放线菌数量稍高于对照，但不是十分明显。到果实成熟期，生防制剂处理后的甜瓜根际放线菌数量已明显高于对照，达2.31×108 /g，高于对照185.45%。从分离的放线菌种类来看，仍以白色类群（Albosporus）、黄色类群（Flavus）、粉红色类群（Roseosporus）和淡紫灰类群（Lavendulae）为主。
3 结论与讨论
3.1 甜瓜根际微生物数量的影响与甜瓜的生长时期有关
甜瓜生长各时期根际微生物数量具有明显的差别。在开花座果期和果实成熟期微生物数量较多，而在果实膨大期根际真菌、细菌和放线菌的数量明显低于其他时期。这可能与甜瓜在果实膨大期旺盛的代谢有关。
3.2 木霉菌制剂能明显改善甜瓜根际微生态环境
植物对根部病害的抗性与根际微生物的多样性（包括其数量、种类、优势种、拮抗菌）有一定的相关性，如抗病品种根际真菌和放线菌数量多于感病品种，而细菌无明显规律性。甜瓜根际真菌数量在甜瓜开花座果期、果实成熟期呈明显的上升趋势，细菌、放线菌数量在甜瓜开花座果期明显高于对照。这说明木霉菌处理对甜瓜根际的微生态环境产生较大的影响。
参考文献
[1] 王英姿，纪明山，祁之秋，等.利用木霉菌生物防治黄瓜枯萎病研究进展[J].北方园艺，2008（10）：81-82.
[2] 王玉全，吴凯，程莹.木霉菌与内生细菌防治枯萎病的协同增效作用研究[J].安徽农业科学，2012，40（14）：8113-8115.
[结果] 接种木霉菌制剂后，甜瓜根际不同生长时期的真菌、细菌、放线菌数量明显增多。[结论] 施用木霉菌制剂，能提高土壤中有益微生物的活性，提高甜瓜的抗病性。
关键词 木霉菌制剂；甜瓜；根际微生态
中图分类号 S652 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）15-013-02
Effects of Trichoderma Preparation on Rhizosphere Microecology of Muskmelon
HUANG Yanqing
（Liaoning Vocational College， Tieling， Liaoning 112099）
Abstract [Objective] The research aimed to study the microecology in rhizosphere. [Method] The changes of the number of fungi， bacteria and actinomycetes in muskmelon rhizosphere soil after the use of trichoderma preparation were studied with isolation and cultivation of soil. [Result] The number of of muskmelon rhizosphere increased significantly after inoculted trichoderma preparation. [Conclusion] Trichoderma preparation could improve the beneficial microbial activity in the soil and the disease resistance of muskmelon.
Key words Trichoderma preparation； Muskmelon； Microecology in rhizosphere
作者簡介 黄艳青（1978- ），女，辽宁铁岭人，讲师，硕士，从事农业科研、教育工作。
收稿日期 20150410
土壤微生态是一个植物-土壤-微生物及其环境条件相互作用的生态系统。土壤微生物数量和活性是土壤肥力的一项重要指标。研究表明，土壤微生物能够帮助植物适应养分胁迫环境，改善土壤养分的吸收作用[1]，因此对根际微生态的研究可间接反映土壤的肥力[2]。笔者分析了施用木霉菌制剂后甜瓜根际土壤中真菌、细菌、放线菌等在甜瓜生长不同时期的数量变化。
1 材料与方法
1.1 材料来源
供试品种为改良齐甜一号（生产厂家）；供试木霉菌制剂由辽宁职业学院实验室自主研制。
1.2 供试土壤
试验于2014年4～7月在温室内进行。供试土壤为壤土，肥力中等。除清除杂甜瓜外，一般不施肥，少量灌水，以减少外界对根际微生物的影响。
1.3 试验设计
在甜瓜移栽期，施用稀释后木霉菌制剂（木霉菌的孢子浓度为5×106个/ml），每穴50 ml，以等量清水为对照。每个小区面积约0.5 m2，共8个小区，随机排列，4次重复。在开花坐果期、果实膨大期、果实成熟期，取样。
1.4 取样
根际土壤取样采用洗涤法，即先将2 cm表土去掉，再挖出全部根系，轻轻抖掉多余沾土，用无菌剪刀和镊子将根系剪入灭菌三角瓶中（含有定量石英砂），并加入100 ml无菌水后于振荡机振荡20 min，再将根系用定量无菌水冲洗3次，三角瓶内水溶液摇匀后即成根际土壤悬浮液。每个处理每次重复取4株根系。
1.5 分离培养基的制备
孟加拉红培养基组成为KH2PO4·3H2O 1.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、蛋白胨 5 g、葡萄糖10 g、孟加拉红 0.033 g、琼脂20 g、蒸馏水1 000 ml，pH 6.8，用于分离真菌。
半选择性培养基TSM组成为MgSO4·7H2O 0.2 g、K2HPO4·3H2O 0.9 g、KCl 0.25 g、NH4NO3 1.0 g、葡萄糖 3.0 g、氯霉素 0.25 g、玫瑰红 0.15 g、敌克松可湿性粉剂 0.3 g、PCNB 0.2 g、琼脂 20 g、蒸馏水1 000 ml，用于分离木霉菌。
NA培养基组成为牛肉膏3 g、酵母膏1 g、蛋白胨5 g、葡萄糖 10 g、琼脂 20 g、蒸馏水1 000 ml，pH 7.0～7.2，用于分离细菌。
高氏一号培养基组成为可溶性淀粉20 g、NaCl 0.5 g、KNO31.0 g、K2HPO4·3H2O 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、琼脂 20 g、蒸馏水 1 000 ml，pH 7.2～7.4，用于分离放线菌。
1.6 根际微生物的分离和计数
把洗下的土壤悬浮液逐级稀释（10-2～10-7）。每个培养皿加稀释液0.25 ml，每个处理3次重复。分离真菌和放线菌取10-2～10-4稀释液，分离细菌取10-4～10-7稀释液。在25 ℃恒温箱中培养真菌和细菌，在30 ℃恒温箱中培养放线菌，7 d后调查单菌落数。
将瓶中土壤悬液用烘至恒重的滤纸过滤，然后烘干到恒重。滤纸2次称重的质量差为根际土干重。 2 结果与分析
2.1 根际真菌数量
从图1可以看出，在开花座果期木霉菌制剂处理的甜瓜根際真菌数量与对照无明显差别，到果实膨大期无论是对照还是木霉菌制剂处理的甜瓜根际真菌数量都明显下降，但用木霉菌制剂处理的甜瓜根际真菌数量较对照有所增加，但不明显。在果实成熟期木霉菌制剂处理的甜瓜根际真菌数量都明显升高，达3.52×106 /g，是对照的139倍。从分离到的真菌种类来看，对照中以青霉、曲霉和瓜果腐霉为主，也有一定量的木霉菌，而木霉菌制剂处理后甜瓜根际则以木霉菌为主，青霉、曲霉较多，但瓜果腐霉较少。
2.2 根际细菌数
从图2可以看出，开花座果期甜瓜根际细菌的数量较多，尤其是木霉菌制剂处理的甜瓜根际细菌数量达5.67×109 /g，是对照的1.55倍。在果实膨大期，根际细菌的数量均有所下降，但经木霉菌制剂处理的甜瓜根际细菌数量下降幅度小于对照。到果实成熟期，对照的根际细菌数量上升较高，达到6.74×109 /g，而木霉菌制剂处理的甜瓜根际细菌数量较果实膨大期有所升高，其数量增加不是十分明显。
2.3 根际放线菌数量
从图3可以看出，在甜瓜生长的各个时期，对照放线菌数量变化不大。在开花座果期、果实膨大期，木霉菌制剂处理甜瓜根际放线菌的数量变化与对照基本相同，果实膨大期放线菌数量稍高于对照，但不是十分明显。到果实成熟期，生防制剂处理后的甜瓜根际放线菌数量已明显高于对照，达2.31×108 /g，高于对照185.45%。从分离的放线菌种类来看，仍以白色类群（Albosporus）、黄色类群（Flavus）、粉红色类群（Roseosporus）和淡紫灰类群（Lavendulae）为主。
3 结论与讨论
3.1 甜瓜根际微生物数量的影响与甜瓜的生长时期有关
甜瓜生长各时期根际微生物数量具有明显的差别。在开花座果期和果实成熟期微生物数量较多，而在果实膨大期根际真菌、细菌和放线菌的数量明显低于其他时期。这可能与甜瓜在果实膨大期旺盛的代谢有关。
3.2 木霉菌制剂能明显改善甜瓜根际微生态环境
植物对根部病害的抗性与根际微生物的多样性（包括其数量、种类、优势种、拮抗菌）有一定的相关性，如抗病品种根际真菌和放线菌数量多于感病品种，而细菌无明显规律性。甜瓜根际真菌数量在甜瓜开花座果期、果实成熟期呈明显的上升趋势，细菌、放线菌数量在甜瓜开花座果期明显高于对照。这说明木霉菌处理对甜瓜根际的微生态环境产生较大的影响。
参考文献
[1] 王英姿，纪明山，祁之秋，等.利用木霉菌生物防治黄瓜枯萎病研究进展[J].北方园艺，2008（10）：81-82.
[2] 王玉全，吴凯，程莹.木霉菌与内生细菌防治枯萎病的协同增效作用研究[J].安徽农业科学，2012，40（14）：8113-8115.