【摘 要】
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目的 通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白.方法 将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJI8质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克
【机 构】
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同济大学附属第十人民医院神经外科,上海长征医院神经外科
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目的 通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白.方法 将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJI8质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克隆至pET-32b(+)质粒,构建pET32b(+)-GGF2表达载体.表达载体转染4种宿主菌,筛选合适者.优化表达时程和IPTG诱导剂量.GGF2大量表达后回收包涵体,复性.复性产物利用His Bind树脂进一步纯化.纯化产物用Western blot鉴定.结果 测序鉴定表明,成功构建pET-32b(+)-GGF2表达载体.筛选结果表明Origami B(DE3)为合适宿主菌.适宜的表达条件为30℃诱导前扩增,浓度25 μmol/L IPTG,37℃诱导2h.所表达外源蛋白相对分子质最和预期一致.回收、纯化后得到纯度约为96％的产物.Western blot鉴定表明所获为GGF2重组蛋白.结论 原核表达方法得到足量GGF2重组蛋白.
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