【摘 要】
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目的 研究温石棉诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的凋亡和活件氧(ROS)的生成,并观察自南基清除剂对其诱导作用的拮抗作用.方法 选用BEAS-2B,用0、5、10、20、100、200μ
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目的 研究温石棉诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的凋亡和活件氧(ROS)的生成,并观察自南基清除剂对其诱导作用的拮抗作用.方法 选用BEAS-2B,用0、5、10、20、100、200μg/cm2浓度的温石棉悬液及0、100、200、400、800、1600 μg/ml的温石棉浸出液,设立正常空白对照、阴性对照(标准硅灰石)和阳性对照(标准石英),用锥虫蓝排斥法检测细胞存活率,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞凋亡片段,流式细胞术检测细胞凋亡率及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测凋亡相关基因caspase-3的表达水平.采用荧光探针2,7-二氯双氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)测定温石棉刺激后细胞产生的ROS水平,并观察自由基清除剂过氧化氢酶、二甲业砜和甘露醇对ROS生成和基因表述水平的影响.结果 温石棉刺激BEAS-2B 24 h后,0、5、10 μg/cm2温石棉悬液和0、100、200μg/ml温石棉浸出液的细胞存活率大于90%.并且检测到凋亡细胞DNA凋亡片段.随着温石棉悬液和浸出液浓度的增加,BEAS-2B凋亡率上升,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P
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