论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：建立复方新会陈皮含片中新会陈皮指标性成分的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以Inertsil ODS-SP柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以乙腈-水为流动相梯度洗脱，橙皮苷的检测波长为283 nm，川陈皮素、橘皮素的检测波长为330nm，流速为1 mL·min-1，柱温30 ℃。结果：橙皮苷、川陈皮素、橘皮素与峰面积积分值呈良好的线性关系;回归方程分别为y=427363x-38147（r=0.9999），y=155126x-13930（r=0.9999），y=86681x-19198（r=0.9997）;平均加样回收率分别为96.72%（RSD=0.6%），98.93%（RSD=0.6%），99.14%（RSD=0.6%）。结论：建立的新会陈皮指标性成分的含量测定方法简便，重复性好，可用于复方新会陈皮含片的质量控制。
【关键词】 复方新会陈皮含片;橙皮苷;川陈皮素;橘皮素;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）16-0036-03
Content Determination of Hesperidin，Nobiletin and Tangeretin in Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets
LIANG Zhiyun CHANG Shuiping ZHANG Ming JIANG Sanyuan
Jiangmen Xin Hui Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jiangmen 529100，China
Abstract：Objcetivet To establish the method for the content determination of the index component in xinhui citri reticulatae pericarpium of buccal tablets. Methods Chromatographic conditions were as follows： Inertsil ODS-SP column （150 mm× 4.6 mm，5 μm） was used with mobile phase of acetonitrile-water system， gradient elution was at a flow rate of 1.0 ml·min-1.The detection wavelength of hesperidin was set at 283 nm.The detection wavelength of nobiletin and tangeretin were set at 330nm.The column temperature was 30 ℃.Results There was a good linear relationship between hesperidin， nobiletin， tangeretin and peak area integral.The regression equations respectively were y=427363x-38147（r=0.9999），y=155126x-13930（r=0.9999），y=86681x-19198（r=0.9997）.The average recovery rates respectively were 96.72%（RSD=0.6%），98.93%（RSD=0.6%），99.14%（RSD=0.6%）.Conclusion The method for the content determination of the index component in xinhui citri reticulatae pericarpium is simple and reproducible， which can be used for the quality control of compound xinhui citri reticulatae pericarpium buccal tablets.
Keywords：Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets; Hesperidin; Nobiletin; Tangeretin; Content Determination
廣陈皮是茶枝柑Citrus reticulata “Chachi”的干燥成熟果皮，以新会陈皮为道地药材，与其他产地的陈皮所含的成分存在差异，按陈皮的检测方法其质量无法达到法定要求，2020年版《中国药典》对广陈皮进行了修订，要求作橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三种成分的含量测定[1]。现代药理研究[2]表明，新会陈皮的黄酮类成分有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗过敏等作用，其中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素是促进胃肠动力的活性物质，橙皮苷的抗氧化活性最强，川陈皮素能舒张支气管起到平喘的治疗效果，橘皮素具有很好的祛痰、理气作用。复方新会陈皮含片是以道地药材新会陈皮为主药的制剂，具有顺气化痰，祛风健胃的功效，用于风寒咳嗽、痰多呕逆。该含片制剂研制过程中，虽然做了橙皮苷的含量测定研究[3]，但并不能真正达到制剂质量控制的要求。因此，本文重新探讨了复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三种成分的含量测定，更好地控制其含片的内在质量，对保证制剂在临床用药中的良好疗效有着重要意义。 1 仪器与试药
LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津）;XY4-180E超声波清洗机（上海析宇仪器有限公司）;AUW120D十万分之一电子分析天平（日本岛津）。
橙皮苷对照品（批号：190802），川陈皮素（批号：200322），橘皮素（批号：190918），均购于成都植标化纯生物技术有限公司。复方新会陈皮含片（批号：20190906，20191010，20191115，由江门市新会区中医院制备，规格：每片重0.8 g）;甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-SP柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）;检测波长：283 nm（0～15 min）、330 nm（15～40 min）;流速：1 mL·min-1;柱温：30 ℃;进样量：10 μL;梯度洗脱条件见表1。
2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品5.78 mg、川陈皮素对照品7.84 mg、橘皮素对照品3.36 mg，分别置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。按8∶1∶1比例，依次精密吸取上述三种对照品溶液置同一个10 mL量瓶中，摇匀，制成混合对照品溶液，其浓度分别为橙皮苷289 μg·mL-1、川陈皮素39.2 μg·mL-1、橘皮素16.8 μg·mL-1。
2.3 供试品溶液的制备 取复方新会陈皮含片研磨成粉末，精密称取粉末约0.5 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，超声处理45 min，放冷，用甲醇补足减失的量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备 取缺少陈皮药材的阴性对照样品，同供试品“2.3供试品溶液的制备”项下操作，制备阴性对照溶液。
2.5 系统适应性试验考察 在上述色谱条件下，精密吸取2.2项下混合对照品溶液、2.3项下供试品溶液和2.4项下阴性对照溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果表明，供试品的保留时间和峰型与混合对照品一致，且阴性对照无干扰。见图1。
2.6 线性关系 精密吸取混合对照品溶液1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算其回归方程分别为：橙皮苷y=427363x-38147（r=0.9999），川陈皮素y=155126x-13930（r=0.9999），橘皮素y=86681x-19198（r=0.9997）。橙皮苷、川陈皮素、橘皮素分别在0.289～5.78 μg、0.0392～0.784 μg、0.0168～0.336 μg的线性范围内，与峰面积值呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验 精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，连续进样6次，测定峰面积值并计算相对标准偏差。橙皮苷的RSD为0.68%，川陈皮素的RSD为1.27%，橘皮素的RSD为0.94%，表明精密度良好。
2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测定并记录峰面积值。试验结果表明供试品溶液在24 h内稳定，供试品中橙皮苷的RSD为1.06 %，川陈皮素的RSD为1.62%，橘皮素的RSD为0.81%。
2.9 重复性试验 精密称取复方新会陈皮含片0.5 g（批号：20191010），共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定并记录峰面积，计算三种成分的含量。橙皮苷的平均含量为9.4624 mg·g-1，RSD为0.73%;川陈皮素的平均含量为0.9249 mg·g-1，RSD为0.34%;橘皮素的平均含量为0.6088mg·g-1，RSD為0.21%。说明本方法重复性良好。
2.10 加样回收试验 取已知三种成分含量的复方新会陈皮含片（批号：20191010），精密称取样品约0.25 g，共5份，分别置于10 mL量瓶中，加入一定量的对照品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。注入高效液相色谱仪，进样测定并记录峰面积，计算橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量。结果见表2。
2.11 样品含量测定 取三批复方新会陈皮含片样品，按“2.3”项下制备方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，外标法计算样品中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量。结果见表3。
3 讨论
广陈皮（新会陈皮）是广东十大道地中药材之一。对新会陈皮的橙皮苷、川陈皮素、橘皮素成分含量测定研究已有报道[4-7]，2020年版《中国药典》一部，陈皮项下对广陈皮橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量列为质量检测指标。复方新会陈皮含片中主药就是新会陈皮，以药粉直接入药，参照药典实验，结果按药典流动相梯度洗脱中，可能是复方制剂中成分较复杂的关系，川陈皮素峰与橘皮素峰之间分离度较差，杂峰影响较大，不能完全分离出指标成分峰，经多次调整流动相比例与分析时间，按表1梯度洗脱结果样品中三种成分峰基线分离度大于1.5，峰形良好，且保留时间适宜。
药典要求广陈皮中含橙皮苷不得少于2.0%，含川陈皮素和橘皮素的总量不得少于0.42%。复方新会陈皮含片实验用量的广陈皮折算，含橙皮苷约3.8%，含川陈皮素和橘皮素的总量约为0.53%，结果表明新会陈皮原材料质量良好。
本文建立的高效液相色谱法测定复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量方法，简便、准确，稳定性好，能较好的控制该制剂的内在质量，是有效的质量标准资料。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2020：199.
[2]梅全喜，杨得坡.新会陈皮的研究与应用[M].中国中医药出版社，2019：202-216.
[3]林子安，梁志云，陈小龙，等. 复方新会陈皮含片中橙皮苷的含量测定[J].广东医科大学学报，2018，36（6）：632-635.
[4]张怀，陈明权，农根林，等.新会陈皮质量控制研究[J].中国医药导报，2019，21（16）：120-124.
[5]钟永翠，巩珺，徐家能，等. 基于3种黄酮类化合物含量比值鉴别广陈皮道地性[J]. 药物分析杂志，2017，37（1）：20-29.
[6]林乐维，蒋林，郑国栋. 不同产地和采收期广陈皮中三种黄柄类成分的含量测定[J]，中药材，2010，33（2）：173-176.
[7]王洋，乐巍，吴德康，等. 不同采收期广陈皮药材三种黄酮类成分的含量测定[J].现代中药研究与实践，2009，23（5）：66-68.
（收稿日期：2021-01-15 编辑：刘 斌）
基金项目：江门市新会区科技局项目（No.201601）。
作者简介：梁志云（1989-），女，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药制剂研究。E-mail：190020601@qq.com
【关键词】 复方新会陈皮含片;橙皮苷;川陈皮素;橘皮素;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）16-0036-03
Content Determination of Hesperidin，Nobiletin and Tangeretin in Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets
LIANG Zhiyun CHANG Shuiping ZHANG Ming JIANG Sanyuan
Jiangmen Xin Hui Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jiangmen 529100，China
Abstract：Objcetivet To establish the method for the content determination of the index component in xinhui citri reticulatae pericarpium of buccal tablets. Methods Chromatographic conditions were as follows： Inertsil ODS-SP column （150 mm× 4.6 mm，5 μm） was used with mobile phase of acetonitrile-water system， gradient elution was at a flow rate of 1.0 ml·min-1.The detection wavelength of hesperidin was set at 283 nm.The detection wavelength of nobiletin and tangeretin were set at 330nm.The column temperature was 30 ℃.Results There was a good linear relationship between hesperidin， nobiletin， tangeretin and peak area integral.The regression equations respectively were y=427363x-38147（r=0.9999），y=155126x-13930（r=0.9999），y=86681x-19198（r=0.9997）.The average recovery rates respectively were 96.72%（RSD=0.6%），98.93%（RSD=0.6%），99.14%（RSD=0.6%）.Conclusion The method for the content determination of the index component in xinhui citri reticulatae pericarpium is simple and reproducible， which can be used for the quality control of compound xinhui citri reticulatae pericarpium buccal tablets.
Keywords：Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets; Hesperidin; Nobiletin; Tangeretin; Content Determination
廣陈皮是茶枝柑Citrus reticulata “Chachi”的干燥成熟果皮，以新会陈皮为道地药材，与其他产地的陈皮所含的成分存在差异，按陈皮的检测方法其质量无法达到法定要求，2020年版《中国药典》对广陈皮进行了修订，要求作橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三种成分的含量测定[1]。现代药理研究[2]表明，新会陈皮的黄酮类成分有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗过敏等作用，其中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素是促进胃肠动力的活性物质，橙皮苷的抗氧化活性最强，川陈皮素能舒张支气管起到平喘的治疗效果，橘皮素具有很好的祛痰、理气作用。复方新会陈皮含片是以道地药材新会陈皮为主药的制剂，具有顺气化痰，祛风健胃的功效，用于风寒咳嗽、痰多呕逆。该含片制剂研制过程中，虽然做了橙皮苷的含量测定研究[3]，但并不能真正达到制剂质量控制的要求。因此，本文重新探讨了复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三种成分的含量测定，更好地控制其含片的内在质量，对保证制剂在临床用药中的良好疗效有着重要意义。 1 仪器与试药
LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津）;XY4-180E超声波清洗机（上海析宇仪器有限公司）;AUW120D十万分之一电子分析天平（日本岛津）。
橙皮苷对照品（批号：190802），川陈皮素（批号：200322），橘皮素（批号：190918），均购于成都植标化纯生物技术有限公司。复方新会陈皮含片（批号：20190906，20191010，20191115，由江门市新会区中医院制备，规格：每片重0.8 g）;甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-SP柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）;检测波长：283 nm（0～15 min）、330 nm（15～40 min）;流速：1 mL·min-1;柱温：30 ℃;进样量：10 μL;梯度洗脱条件见表1。
2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品5.78 mg、川陈皮素对照品7.84 mg、橘皮素对照品3.36 mg，分别置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。按8∶1∶1比例，依次精密吸取上述三种对照品溶液置同一个10 mL量瓶中，摇匀，制成混合对照品溶液，其浓度分别为橙皮苷289 μg·mL-1、川陈皮素39.2 μg·mL-1、橘皮素16.8 μg·mL-1。
2.3 供试品溶液的制备 取复方新会陈皮含片研磨成粉末，精密称取粉末约0.5 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，超声处理45 min，放冷，用甲醇补足减失的量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备 取缺少陈皮药材的阴性对照样品，同供试品“2.3供试品溶液的制备”项下操作，制备阴性对照溶液。
2.5 系统适应性试验考察 在上述色谱条件下，精密吸取2.2项下混合对照品溶液、2.3项下供试品溶液和2.4项下阴性对照溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果表明，供试品的保留时间和峰型与混合对照品一致，且阴性对照无干扰。见图1。
2.6 线性关系 精密吸取混合对照品溶液1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算其回归方程分别为：橙皮苷y=427363x-38147（r=0.9999），川陈皮素y=155126x-13930（r=0.9999），橘皮素y=86681x-19198（r=0.9997）。橙皮苷、川陈皮素、橘皮素分别在0.289～5.78 μg、0.0392～0.784 μg、0.0168～0.336 μg的线性范围内，与峰面积值呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验 精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，连续进样6次，测定峰面积值并计算相对标准偏差。橙皮苷的RSD为0.68%，川陈皮素的RSD为1.27%，橘皮素的RSD为0.94%，表明精密度良好。
2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测定并记录峰面积值。试验结果表明供试品溶液在24 h内稳定，供试品中橙皮苷的RSD为1.06 %，川陈皮素的RSD为1.62%，橘皮素的RSD为0.81%。
2.9 重复性试验 精密称取复方新会陈皮含片0.5 g（批号：20191010），共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定并记录峰面积，计算三种成分的含量。橙皮苷的平均含量为9.4624 mg·g-1，RSD为0.73%;川陈皮素的平均含量为0.9249 mg·g-1，RSD为0.34%;橘皮素的平均含量为0.6088mg·g-1，RSD為0.21%。说明本方法重复性良好。
2.10 加样回收试验 取已知三种成分含量的复方新会陈皮含片（批号：20191010），精密称取样品约0.25 g，共5份，分别置于10 mL量瓶中，加入一定量的对照品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。注入高效液相色谱仪，进样测定并记录峰面积，计算橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量。结果见表2。
2.11 样品含量测定 取三批复方新会陈皮含片样品，按“2.3”项下制备方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，外标法计算样品中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量。结果见表3。
3 讨论
广陈皮（新会陈皮）是广东十大道地中药材之一。对新会陈皮的橙皮苷、川陈皮素、橘皮素成分含量测定研究已有报道[4-7]，2020年版《中国药典》一部，陈皮项下对广陈皮橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量列为质量检测指标。复方新会陈皮含片中主药就是新会陈皮，以药粉直接入药，参照药典实验，结果按药典流动相梯度洗脱中，可能是复方制剂中成分较复杂的关系，川陈皮素峰与橘皮素峰之间分离度较差，杂峰影响较大，不能完全分离出指标成分峰，经多次调整流动相比例与分析时间，按表1梯度洗脱结果样品中三种成分峰基线分离度大于1.5，峰形良好，且保留时间适宜。
药典要求广陈皮中含橙皮苷不得少于2.0%，含川陈皮素和橘皮素的总量不得少于0.42%。复方新会陈皮含片实验用量的广陈皮折算，含橙皮苷约3.8%，含川陈皮素和橘皮素的总量约为0.53%，结果表明新会陈皮原材料质量良好。
本文建立的高效液相色谱法测定复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量方法，简便、准确，稳定性好，能较好的控制该制剂的内在质量，是有效的质量标准资料。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2020：199.
[2]梅全喜，杨得坡.新会陈皮的研究与应用[M].中国中医药出版社，2019：202-216.
[3]林子安，梁志云，陈小龙，等. 复方新会陈皮含片中橙皮苷的含量测定[J].广东医科大学学报，2018，36（6）：632-635.
[4]张怀，陈明权，农根林，等.新会陈皮质量控制研究[J].中国医药导报，2019，21（16）：120-124.
[5]钟永翠，巩珺，徐家能，等. 基于3种黄酮类化合物含量比值鉴别广陈皮道地性[J]. 药物分析杂志，2017，37（1）：20-29.
[6]林乐维，蒋林，郑国栋. 不同产地和采收期广陈皮中三种黄柄类成分的含量测定[J]，中药材，2010，33（2）：173-176.
[7]王洋，乐巍，吴德康，等. 不同采收期广陈皮药材三种黄酮类成分的含量测定[J].现代中药研究与实践，2009，23（5）：66-68.
（收稿日期：2021-01-15 编辑：刘 斌）
基金项目：江门市新会区科技局项目（No.201601）。
作者简介：梁志云（1989-），女，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药制剂研究。E-mail：190020601@qq.com