【摘 要】
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目的 构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2).方法 首先以E3大鼠肝脏cD-NA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用AgeⅠ、E
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目的 构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2).方法 首先以E3大鼠肝脏cD-NA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用AgeⅠ、EcoRⅠ双酶切pLJM1-MGFP载体和目的基因片段,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;之后再将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;最后用PCR、AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切以及DNA测序鉴定重组质粒.结果 PCR、AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切结果均提示pLJM1-Smad2重组载体中插入了目的片段Smad2;将含有目的片段的阳性重组体克隆送上海生工进行DNA测序,并将测序结果与NCBI数据库的进行比对,确定插入片段无突变、序列完全正确,证实pLJM1-Smad2重组载体中成功插入了目的基因片段Smad2.结论 成功构建了转录因子Smad2的高表达载体pLJM1-Smad2.
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