【摘 要】
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目的构建带有肠激酶序列的pET32a-neuritin重组质粒,为后期酶切去除重组蛋白His标签奠定基础,并筛选高表达菌株。方法利用基因工程技术在pET32a载体自身His标签和肠激酶序列
【机 构】
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石河子大学医学院生化教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室
【基金项目】
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浙江省重点研发项目(2019C03060)
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目的构建带有肠激酶序列的pET32a-neuritin重组质粒,为后期酶切去除重组蛋白His标签奠定基础,并筛选高表达菌株。方法利用基因工程技术在pET32a载体自身His标签和肠激酶序列之后克隆插入neuritin基因。首先PCR扩增目的基因neuritin,与原核表达载体pET32a重组后,重组质粒转化DH5α感受态,采用菌落PCR、双酶切鉴定,并将鉴定阳性的重组质粒转化BL21感受态后,测序鉴定。阳性转化子经IPTG诱导表达蛋白后,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白。对50个阳性
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